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ArcticExpress（DE3）pRARE2 感受态细胞操作方法

点击次数：2916 发布时间：2022/6/15 13:56:38

ArcticExpress（DE3）pRARE2 感受态细胞操作方法：

1. 感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13 h。
基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜，即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸：即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体，毫无例外地存在于一切细胞内，核糖体，是蛋白质合成的机器，在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性，包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动.
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse TIMP-2)
小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse TNF-a)
小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse TNF-b)
小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse TNF-r)
小鼠组织纤溶酶原激活剂(mouse t-PA)
小鼠转铁蛋白(mouse Transferrin)
小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse TSLP)
小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)
小鼠可溶性肿瘤坏死因子-a受体(mouse sTNF-aR)
小鼠组织多肽抗原(mouse TPA)
小鼠血小板生成素(mouse TPO)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(mouse TRAIL/APO 2L)
小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体1(mouse TRAIL R1)
小鼠凝血酶敏感蛋白-1(mouse TSP-1)
小鼠血栓调节蛋白(mouse TM)
小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(mouse uPA)
小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物受体(mouse uPA-R)
小鼠血管细胞粘附分子-1(mouse sVCAM-1)
小鼠血管内皮生长因子(mouse VEGF)
小鼠血管内皮细胞生长因子B(mouse VEGF-B)
小鼠血管内皮细胞生长因子C(mouse VEGF-C)
小鼠血管内皮细胞生长因子D(mouse VEGF-D)
小鼠血管内皮细胞生长因子受体1(mouse VEGF-R1)

细胞

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