抗人EIFIAY单抗杂交瘤细胞；B4B5C5培养步骤_技术交流_技术文章

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抗人EIFIAY单抗杂交瘤细胞；B4B5C5培养步骤

点击次数：2944 发布时间：2022/5/26 14:55:08

抗人EIFIAY单抗杂交瘤细胞；B4B5C5培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mLwan全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的wan全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，wan全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

2、对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心8-10分钟，弃上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或瓶中。

方法三：可选择半数换液方式，弃半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基新皿中或者瓶中。

1）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。弃培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，进行离心收集，1000RPM条件下离心8-10分钟，去除上清，按冻存数量加入到冻存液中。

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

NSC，大鼠神经干细胞

RN-h, 大鼠海马趾神经元

rEPC，大鼠内皮祖细胞-骨髓

RN-c, 大鼠皮质神经元

RN-s, 大鼠纹状体神经元

RSC, 大鼠雪旺细胞

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CSC, 小鼠心肌细胞

小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）

MEF, 小鼠胚胎成纤维细胞

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mCF, 小鼠心脏成纤维细胞

MN-c, 小鼠皮质神经元

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人绒毛膜毛细血管内皮细胞

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