芥末源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒使用方法:
一、阴沟肠杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)
1. 注意:产品仅供科研使用由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的片段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR用模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+2个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+9个PCR管,其中N+2个用于上步得到的N+2个样品,1个用于PCR阴性对照,6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 产品仅用于科研在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加)。
考马斯亮蓝R-250
考马斯亮蓝G-250
广谱彩虹预染蛋白Marker
甘氨酸
定影粉
蛋白银染试剂盒
蛋白标准溶液-BSA
彩虹预染中分子量蛋白Marker
Yeast Protein Extraction Reagent/酵母蛋白抽提试剂
Yeast Protein Extraction Kit/酵母蛋白抽提试剂盒
X线暗盒
X光胶片
Westrrn Blot Loading ControlsWestrrn Blot/内参阳性对照
Western中低分子量蛋白Marker
Western 中分子量蛋白marker
Western Blot封闭液Ⅱ(奶粉,pH7.5)/Blocking Buffer(milk)
Western Blot封闭液Ⅰ(BSA,pH7.5)/Blocking Buffer(BSA)
V5标签免疫亲和介质
V5 Tag IP/Co-IP Kit/V5标签免疫沉淀试剂盒
U937/人髓系白血病细胞
TRX标签蛋白裂解液
Tris-Glycine SDS
