人参源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则_技术交流_技术文章

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人参源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则

点击次数：2965 发布时间：2022/3/17 14:44:25

人参源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则:

1, 先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。

2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的*能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易bao证分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的降低,及在SG分析中非特异信号。

4, 为了bao证效率和重复性,应避免重复的核苷酸序列,尤其是G(不能有4个连续的G)

5, 将引物和探针互相进行配对检测,以避免二聚体和发卡结构的形成。

b),探针设计指导

1,在设计引物之设计探针

2,探针的Tm值应在68-70℃之间,如果是目测探针,则要仔细审查GC富含区。

3,探针的5’端要避免有鸟氨酸,5’G会有淬灭作用,即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在

4,选择C多于G的链作探针,G的含量多于C会降低反应效率,这时就应选择配对的另一条链作为探针。

6, 探针应尽可能的短,不要超过30个bp。

7, 检测探针的DNA折叠和二结构。

HuH-7人肝癌细胞

RBE, 人肝胆管癌细胞

MiaPaCa-2, 人胰腺癌细胞

KM3, 人多发性骨髓瘤细胞

QGY-7701, 人肝癌细胞

PANC-1, 人胰腺癌细胞

U266B1 [U266], 人多发性骨髓瘤细胞

Hep G2, 人肝癌细胞系

PC-12(高分化)，PC12，大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(高分化)

GH3, 大鼠垂体生长激素腺瘤

Hepa 1-6, 小鼠肝癌细胞

QBC-939, 人胆管癌细胞

B16-F10, 小鼠黑色素瘤高转移细胞

SGC-7901, 人胃腺癌细胞系

SK-N-SH, 人神经母细胞瘤细胞

SK-MEL-1, 人皮肤黑色素瘤细胞

A549, 人肺癌细胞系

SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株

A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株

SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞

WM35, 人黑色素瘤细胞

BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株

U-2 OS, 人骨肉瘤细胞

WM451, 人黑色素瘤细胞

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