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磷酸化转录调节因子CEBP β抗体操作步骤

点击次数:272 发布时间:2026/9/9 11:57:05

磷酸化转录调节因子CEBP β抗体的常规实验操作步骤,以最常用的Western Blot和免疫组化两类场景为例,核心流程如下:


🧫 Western Blot 抗体杂交操作

‌抗体准备‌:提前确定抗体稀释度,用含BSA的专用抗体稀释液稀释抗体,避免用纯水直接稀释导致抗体变性。

‌封闭后孵育一抗‌:将稀释好的磷酸化CEBP β抗体与转印后的膜共同孵育,优先选择‌4℃过夜‌孵育,保证低丰度磷酸化蛋白有充足的结合时间。

‌洗膜‌:孵育结束后用TBST缓冲液洗涤3-5次,每次5分钟,去除未结合的游离一抗。

‌二抗孵育‌:加入对应种属的HRP标记二抗,室温避光孵育‌1小时‌即可。

‌终洗涤‌:再次用TBST洗涤3-5次,每次5分钟,完成后即可进行后续显影操作。

🔬 免疫组化(石蜡切片)操作

‌抗原修复完成后‌,用5% BSA封闭液室温封闭30分钟,封闭非特异性结合位点。

‌一抗孵育‌:弃去封闭液,滴加稀释好的磷酸化CEBP β抗体,4℃湿盒内孵育过夜。

‌洗涤‌:PBST缓冲液洗涤3次,每次5分钟,去除未结合的一抗。

‌二抗孵育‌:滴加对应的生物素化二抗,室温孵育1小时。

‌后续显色‌:完成二抗孵育和洗涤后,即可按常规免疫组化流程进行DAB显色、复染、封片操作。

📌 通用操作注意事项

抗体稀释比例可通过预实验优化调整,常规推荐范围为‌1:500-1:10000‌,优先参考对应抗体说明书的推荐比例。

稀释后的抗体建议一次性用完,未用完的部分不可再次冻存,避免抗体活性下降。

所有洗涤步骤需轻轻晃动样本,避免用力过猛导致膜或切片样本脱落。


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