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如何正确操作鸡TGF-β2 ELISA试剂盒

点击次数：1328 发布时间：2025/12/24 13:07:47

操作鸡TGF-β2 ELISA试剂盒，核心是‌规范流程+细节把控‌。我来帮你梳理关键步骤和避坑点，照着做就能出好结果。

一、实验前准备

‌试剂盒选择‌：根据样本量选48T或96T规格，注意灵敏度（通常<10 pg/mL）和检测范围（如10-250 pg/mL）是否匹配你的样本浓度。

‌样本处理‌：血清/血浆样本避免溶血，离心后2-8℃保存48小时，长期需-20℃/-80℃分装，‌避免反复冻融‌。

‌试剂平衡‌：所有试剂（如标准品、检测抗体）使用前需回温至室温，避免孔间温差影响结果。

二、标准品配制

‌溶解‌：冻干标准品按说明书用样品稀释液复溶，冰上静置5-10分钟，轻轻混匀后分装保存。

‌稀释‌：用硅化EP管，按梯度稀释（如2000 pg/mL至0 pg/mL），充分混匀，避免枪头刮孔底。

三、实验操作步骤

‌包被‌：捕获抗体用包被缓冲液稀释（1-10 μg/mL），每孔100 μL，4℃过夜或37℃ 2小时，洗板3次。

‌封闭‌：每孔加200-300 μL封闭液（如5% BSA），37℃ 1-2小时，洗板3次。

‌加样与孵育‌：

标准品孔：加入系列稀释标准品（如0、1、10、100、1000 ng/mL）。

样品孔：加入待测样品（稀释后避免钩状效应）。

阴性/空白对照孔：加稀释液。

37℃孵育1-2小时，洗板3次。

‌加检测抗体‌：酶标抗体用封闭液稀释，每孔100 μL，37℃孵育1小时，洗板3-5次。

‌显色‌：每孔加100 μL TMB底物，避光室温孵育10-30分钟，加50 μL终止液（如2M H₂SO₄）。

‌读板‌：酶标仪450 nm测OD值，计算样品浓度。

四、关键注意事项

‌洗涤‌：严格按说明书控制体积、时间和次数，避免交叉污染。

‌显色控制‌：观察显色梯度，避免过度反应。

‌读板校正‌：540 nm和570 nm处校正，补偿微孔板缺陷。

五、常见问题解决

‌高背景‌：检查洗涤是否，避免洗液溢出或污染。

‌显色异常‌：检查底物是否失效或孵育时间是否过长。

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