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AD激酶(NADK)测试盒微量法测定步骤

点击次数：2756 发布时间：2024/12/12 16:36:36

AD激酶(NADK)测试盒微量法测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂一和试剂二 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min 以上。

3、工作液Ⅰ的配制：在试剂三中加入 5mL 试剂一，充分混匀待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

工作液Ⅱ的配制：在试剂四中加入 18mL 试剂二，充分混匀待用；用不完的试剂分装后

-20℃保存，禁止反复冻融；

4、加样表

试剂名称(μL) 测定孔对照管

样本 20 20

工作液Ⅰ 80

试剂一 80

充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min，立即煮沸2min（盖紧，防止水分散失）冰浴冷却，10000g，25℃离心 10min，取上清

上清液 40 40

工作液Ⅱ 160 160

加完试剂混匀，室温静置 15min，340nm 下测定吸光值，ΔA=A 测定-A 对照。

NADK 活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）NADK 活力的计算:

单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟生成 1 nmol 的 NADP 定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷V 样÷T=53.59×ΔA

2、组织、细菌或细胞中 NADK 活力的计算:

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。

NADK（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=53.59×ΔA÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol NADP 定义为一个酶活力单位。

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