染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法_技术交流_技术文章

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染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法

点击次数：2812 发布时间：2023/10/9 13:22:44

染料法荧光定量PCR试剂盒使用方法:

一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA 段作为阳性对照。

2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。

4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

具有下列特点：

1.根据指标的保守序列设计的一性引物，与相关病毒无交叉反应。

2.灵敏度比常规 PCR 高 2-3 个数量，可以达到几百拷贝/反应。

3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。

4.一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。

5.本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。

6.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

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