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转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒反应五要素

点击次数:3453 发布时间:2021/1/19 11:18:58

转基因植物Sad1基因核酸检测试剂盒反应五要素:

参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
人羰基还原酶[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)ELISA检测试剂盒
人碳酸酐酶9(CA9)ELISA检测试剂盒
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人碳酸酐酶(CA)ELISA检测试剂盒
人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)ELISA检测试剂盒
人肽聚糖识别蛋白L(PGRP-L)ELISA检测试剂盒
人肽聚糖(PG)ELISA检测试剂盒
人肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)ELISA检测试剂盒
人胎球蛋白A(Fetuin A)ELISA检测试剂盒
人胎盘生长因子(PLGF)ELISA检测试剂盒
人胎盘碱性磷酸酶(PLAP)ELISA检测试剂盒
人胎盘蛋白13(PP13)ELISA检测试剂盒
人胎盘催乳素(HPL)ELISA检测试剂盒
人胎儿血红蛋白(HBF)ELISA检测试剂盒
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人羧化不全骨钙素(ucOC)ELISA检测试剂盒
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