疟原虫通用LAMP试剂盒实验操作步骤_技术交流_技术文章

1：样品准备：取1毫升细胞培养上清（贴壁和悬浮细胞都可以,*已培养48小时以上），在16000g离心5分钟，小心弃去上清，避免丢失沉淀（沉淀量有可能很少，目视看不到）。将沉淀用无菌PBS重悬，在16000g离心5分钟，同样小心弃去上清，如此反复用无菌PBS洗三次。*将获得的沉淀用100微升超纯水重悬，置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。

2：PCR反应的准备：

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加个阴性和个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。

注意事项:

1. 建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。

2. 试剂Buffer AL若低温保存，易产生沉淀。在使用务必将其在室温中放置段时间，也可在37℃水浴中预热10 min，以溶解沉淀，混匀后再使用。

3. 电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现大团拖尾亮带，影响实验结果。

4. 建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率佳。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴次性手套操作。

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