牛型放线菌PCR试剂盒数据收集及处理_技术交流_技术文章

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牛型放线菌PCR试剂盒数据收集及处理

点击次数：3226 发布时间：2020/4/21 14:46:39

牛型放线菌PCR试剂盒基础理论：

1、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析、荧光定量PCR线性关系成立的条件分析。

左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着左图横坐标是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度Rn,改图反映的是各个样品随着每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是每轮PCR反应，其总的荧光量的实时变化；右图横坐标也是PCR循环次数，纵坐标是总的荧光强度与荧光本底的差值RT RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直总的荧光强度与荧光本底的差值RT –RB即△Rn的对数，在右图中确定阈值线，该直线上所有样品的RT RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。线上所有样品的RT –RB的对数都相同，荧光定量PCR的线性关系才会成立。

数据采集

具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时，最大吸收光谱在 471 nm，结合 DNA 时的最大吸收光谱在 500 nm，最大发射光谱在 530 nm。信号采集可以设置在复性或延伸步骤。

数据处理

14. 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的log 值，再推算出其浓度。

15. 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照 Ct 必须大于或等于 40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于或等于30。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于或等于 35 则为阳性。如果在 35-40 之间，则重复一次。重复实验的 Ct 值如果大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40，则为阳性。

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