马可尼小囊虫PCR试剂盒操作步骤说明_技术交流_技术文章

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马可尼小囊虫PCR试剂盒操作步骤说明

点击次数：3300 发布时间：2020/4/14 14:15:02

马可尼小囊虫PCR试剂盒操作步骤：

1：样品准备：取1毫升细胞培养上清（贴壁和悬浮细胞都可以,最好已培养48小时以上），在16000g离心5分钟，小心弃去上清，避免丢失沉淀（沉淀量有可能很少，目视看不到）。将沉淀用无菌PBS重悬，在16000g离心5分钟，同样小心弃去上清，如此反复用无菌PBS洗三次。最后将获得的沉淀用100微升超纯水重悬，置于100℃水浴中孵育5分钟。如此制备好的样品可在4℃保存1到2个月。

2：PCR反应的准备：

待各组份融化后先瞬时离心，然后轻弹混匀。按下表在已灭菌的PCR管中配制反应体系，每次实验需加一个阴性和一个阳性对照，测试反应管可以有多个。配制过程中应注意无菌，戴口罩，并注意避免操作产生的气溶胶造成样品间的交叉污染，推荐在有风压的设备如超净台或生物安全柜中进行操作。建议配制完毕后瞬时离心以使液体沉至管底。

特点： ①特异性引物是针对高度保守的支原体16S rRNA序列设计的，可用于检测非常广泛的支原体种类，不受真核细胞或细菌DNA干扰。经本试剂盒测试的支原体菌株涵盖了所有常见的支原体污染种类； ②灵敏度极高，最低仅需10个拷贝的支原体基因组即可使检测呈阳性； ③阳性对照所用引物与支原体检测相同，可帮助判断假阴性现象，避免假阴性导致的误判； ④包含PCR反应所需的所有成分，只需进行一次PCR反应，使用方便。

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