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兔（rabbit）血管性血友病因子操作步骤

点击次数：3753 发布时间：2019/12/20 14:52:46

兔（rabbit）血管性血友病因子elisa试剂盒的液体类标本：

包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1)血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2)血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3)尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4)细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5)组织标本：

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

一、操作步骤

1.每孔分别加入已稀释的样品、标准品各100ul。

2.将板置于37℃温育30分钟。

3.甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。

4.每孔加入酶标偶合液100ul。

5.将板置于37℃温育30分钟。

6.甩尽板中液体，用应用洗涤液进行洗涤，每次停留30秒，在纸上拍干。重复操作5次。

7.每孔加底物A、底物B各50 ul，置37℃恒温箱反应15分钟。

8．每孔加终止液50ul，于450nm波长读O.D.值。

二、注意事项

1.此试剂为体外检测试剂，效期内使用，试剂应视为传染物，不同总批号的试剂不能混用。

2.使用前应将盒内各试剂取出，室温放置至少30分钟。

3.保存于2-8℃，请勿冷冻，有效期请见盒内标示。

4.浓缩洗涤液出现结晶后，请于37℃孵育15分钟

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