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MTT法检测细胞生长实验步骤

点击次数:3994 发布时间:2018/12/11 10:34:53

我公司进口elisa试剂盒为您特别分享:MTT法检测细胞生长实验。您知道吗?MTT法也就是MTT比色法,这种方法就是用来检测检测细胞存活和生长的。
这个方法中的MTT浓度为5mg/ml,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。您在配制和保存的过程中,容器用铝箔纸包住。
实验步骤:
1、取96孔细胞培养板,每孔中加0.1ml含2×104 ~10×104 靶细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),在37℃ 5%CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养2~3小时让细胞帖壁。
2、用RPMI-1640培养液2~10倍递次稀释细胞因子标准品,根据情况2~5倍递次稀释待检样品,每孔加0.1ml稀释的标准品和待检样品,每个稀释度3个重复孔。对照孔6个:3个阳性对照孔,每孔加0.1ml含大剂量细胞因子的RPMI-1640培养液,3个阴性对照孔,每孔加0.1ml RPMI-1640培养液。在37℃ 5% CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养24~48小时或预定的时间。
3、吸去培养液,用PBS洗涤一次。
4、每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液,在37℃ 5% CO2 的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4~6小时。
5、每孔加0.1ml酸化异丙醇,也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化异丙醇,在振荡器上振荡混匀,让还原产物充分溶解。置酶联检测仪上测定光密度(OD)值,检测波长570nm,参考波长630nm。以OD值对样品稀释度作图,比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。

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