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分享检验假单胞菌属的方法

点击次数：3761 发布时间：2018/11/15 10:40:13

样品先在GVC增菌液中进行增菌，然后划线接种于PDA平板，挑选可疑菌落进行革兰氏染色观察及氧化酶试验。如为革兰氏阴性小杆菌，氧化酶试验阴性，再接种于卵黄琼脂平板和SS平板。

　　从卵黄琼脂平板上挑取卵磷脂酶阳性、并带有彩虹环的单个菌落，接种于马铃薯－葡萄糖琼脂斜面，获得纯培养物。

　　将纯培养物分别接种于 Hugh-Leifson培养基，蛋白胨水，缓冲蛋白胨水，西蒙氏柠檬酸盐培养基，糖发酵管及苯丙酸培养基，进行生化反应试验。

　　同时利用纯培养物进行血清分型鉴定。

　　初步鉴定为椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌株，进行产毒培养和小鼠毒力试验，同时进行米酵菌酸的测定。

说明：

1、分离培养：

　　该菌在马铃薯－葡萄糖琼脂平板上菌落为1~2mm灰白色或乳黄色，光滑、湿润，边缘整齐，培养48h后，中心有凸起，呈草帽状，菌落周围产生黄绿色色素，扩散到基质中。

　　在卵黄琼脂平板上，菌落表面光滑，湿润，48h后，菌落周围形成乳白色混浊环，在斜射日光下，可见环的周围呈现虹彩现象。

　　该菌在SS琼脂平板上不生长。

2、O/F试验

　　将该菌培养在Hugh-leifson培养基，方法是挑取少量培养物做穿刺接种，同时接种两支培养基，其中一支于接种后滴加溶化的1％琼脂1~2mL于表面，放30℃培养。该菌为氧化型。封口培养不产酸，开口培养产酸。

3、本菌与假单胞菌的鉴别

　　椰毒假单胞菌酵米亚种与椰毒假单胞菌各种培养性状，生物第学性状基本一致，只在侧金盏花醇的利用上有区别。椰毒假单胞菌酵米亚种侧金盏花醇为阳性。

4、米酵菌酸的判定

　　从中毒样品中提取米酵菌酸，包括发酵食品或变质银耳，或分离出的椰毒假单胞菌酵米面亚种中提取的米酵菌酸，其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg（食品）才有意义。

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