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介绍几种二抗探针的优缺点

点击次数：3867 发布时间：2018/8/21 10:34:28

酶：主要有两种不同的酶耦联物，HRP和AP。比较而言，前者更经济、快速、稳定，而后者较前者更为灵敏，通常情况下，HRP广泛应用于免疫组化，western blot 和 ELISA 中，而碱性磷酸酶（AP）更适合于固相的免疫检测实验，如ELISA和western blot.

荧光基团：

1.FITC：FITC是广泛使用的荧光基团，但其zui大的缺点是淬灭快，使用抗淬灭剂可以减轻。

2.AMCA：常用在多标记实验中，如免疫荧光、流式细胞术。其缺点是，淬灭快，且由于肉眼不能很好的检测其所激发的蓝色荧光，因而AMCA耦联的二抗更适用于检测大量存在的抗原。

3.花青染料（Cy2,Cy3,Cy5）：Cy2比FITC更稳定，且在表面荧光显微镜下，Cy2的荧光FITC更强。Cy3和Cy5比大多数荧光基团更亮，更稳定，背景更弱。二者常在共聚焦显微实验中作多标记。但Cy5的缺点是不能用表面荧光显微镜观察，因此通常用具有远红外检测器的共聚焦显微镜观察。

4.TRITC,RRX,TR:TRITC经常和FITC一起用于双标记实验中，也可以使用RRX或TR，但TR会产生较高的背景。在使用装有氪氢灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2（或FITC）及Cy5一起使用，因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，且和这两者的重叠很少。

5.PE：常和FITC一起用于流式细胞术双标记实验。

6.生物素：生物素（biotin）可以和抗生素蛋白（avidin）发生不可逆反应而紧密结合在一起。首先加入生物素标记的二抗，在加入耦联有酶或荧光集团的avidin、ExtrAvidin或streptavidin，后者能够结合于二抗表面的多个位点上，从而极大的放大检测信号。

阴离子转运蛋白-3IgG大鼠C肽(C-Peptide)
吲哚-3-乙酸/植物生长素IgG大鼠C反应蛋白(CRP)
吲哚-3-乙酸/植物生长素单克隆IgG大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)
荧光标记鼠抗人甲胎蛋白单克隆IgG大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)
荧光素Alexa Fluor 555标记CD105IgG大鼠c-Jun氨基末端激酶(JNK)
荧光素Alexa Fluor350标记CD29IgG大鼠c-jun
荧光素Alexa Fluor488标记CD90IgG大鼠c-fos
荧光素Cy3标记CD3IgG大鼠CD8分子(CD8)

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