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筛选菌株的实验步骤
点击次数：5021 发布时间：2018/7/24 9:59:38
[目的] 乳酸链球菌素（nisin）是一种天然生物活性抗菌肽，对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用，而用作食品的防腐剂。本研究通过建立高通量筛选方法，实现高效快速省力的高产菌株筛选，为工业上筛选高产菌株提供研究方案。
[方法] 通过对Lactococcus lactis ATCC11454菌株进行紫外诱变，获得2511株突变株。利用Biomek FXP自动工作站建立96微孔板的高通量筛选方法，突变株经高通量挑选、菌种培养及菌液稀释后，加入到生长至对数中期的藤黄微球菌中，采用改进后的比浊法快速检测nisin生物活性。用此方法对突变株进行初筛、复筛后可得到nisin高产菌株，并通过摇瓶发酵评估高通量筛选方法。
[结果] 确定比浊法检测的条件为：nisin活性稀释在10-25 IU/mL范围内，与藤黄微球菌反应2 h后检测藤黄微球菌的菌体量（OD600）。2511株突变株经过2轮高通量筛选，最终获得约50株产量提升的菌株，对其中8株进行摇瓶精确测量，显示产量均有提高，并且其中一株产量提升了30%，成功建立了高通量筛选nisin高产菌株的方法。
[结论] 利用比浊检测法，在其基础上成功建立高通量筛选高产nisin菌的方法，经过初筛复筛，整个周期由1人耗时5 d即可完成2511株突变株的筛选工作。相较于传统的选育方法，高通量筛选具有快速、稳定、高效的特点，提高了筛选效率，缩短了选育周期，是工业上筛选高产nisin菌的有效手段。
乳酸链球菌素(nisin)是乳酸菌产生的一种天然活性抑菌多肽，属于羊毛硫抗生素家族。成熟的nisin由34个氨基酸构成，对于大多数革兰氏阳性菌及其芽孢具有强烈的抑制作用，在与EDTA等共同作用时对革兰氏阴性菌也具有杀伤作用，是唯一被批准用于食品防腐的细菌素。Nisin对蛋白酶特别敏感，在消化道中能很快被α-胰凝乳蛋白酶分解而不影响肠道内正常菌群，对人体基本无毒性，也不与医用抗生素产生交叉抗药性。现已成为一种极具前景的绿色食品添加剂和潜在的抗生素替代品，被广泛应用于食品工业及生物医药领域。
Phospho-Caspase-9 (Tyr153) 畸胎瘤衍化生长因子抗体(N端)
Phospho-Caveolin-1 (Tyr14) 畸胎瘤衍化生长因子抗体(C端)
phospho-CBL2(Tyr731) 基质细胞衍生因子－1抗体
phospho-CBL2(Tyr774) 基质金属蛋白酶-9抗体
Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 基质金属蛋白酶-9抗体
Phospho-CD19 (Tyr531) 基质金属蛋白酶-8抗体
phospho-CD244 (Tyr266) 基质金属蛋白酶-7抗体
Phospho-cdc2 (Ser39) 基质金属蛋白酶-3抗体
Phospho-cdc2 (Thr14) 基质金属蛋白酶-2抗体
Phospho-cdc2 (Thr161) 基质金属蛋白酶-26抗体
Phospho-cdc2 (Tyr15) 基质金属蛋白酶-24抗体
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