细胞冻存及程序降温细胞冻存的心得_技术交流_技术文章

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细胞冻存及程序降温细胞冻存的心得

点击次数：4355 发布时间：2017/10/24 10:55:56

美国ATCC已全面替换有毒异丙醇细胞冻存盒为无液体冻存盒，想起以前细胞冻存4度，20度，80度的放，非常痛苦，特针对细胞冻存及程序降温细胞冻存目前写了一些心得。

1.关于细胞冻存体积，普通细胞冻存1ml体系是最优的，2ml其实都嫌多了，更不需要大休积。大体积其实是浪费血清和培养基。老师曾试过用2ml体系配合冻存盒冻存3个T75大瓶的细胞，密度进至7次方，复苏存活率和普通密度冻存没有任何区别，当然土豪除外。

2.关于细胞冻存液，冻存 DMSO10%比率是不动的.DMSO推荐Sigma D2650,血清普通细胞一般10%-20%,原代细胞干细胞等珍贵细胞看实验室宽松与否可用多至90%血清（这时体系可减至0.5ml,省血清省的杠杠滴，原代细胞本身细胞少的话体系甚至可以减至200微升）。无血清培养的原代细胞，不管厂家推荐的多厉害，其实根本不需要用他们的无血清冻存液，老师冻存过几十种原代细胞干细胞，许多比你们的细胞娇贵多了，老师和这些细胞谈笑风生，这些细胞用普通血清伺侯就可以了。但一定要记住，要冰冷.不让细胞有常温代谢机会，细胞复苏后加足量的冰冷的PBS稀释血清后的冰冷的条件下尽快离心弃上清就可以了。

3.关于细胞的复苏热水的温度，细胞复苏用的热水的温度，老师用的很吓人的，老师一般是用高达60度的热水龙头出来的水复苏细饱的，技巧是用手拿住冻存管，迅速在热水里晃动，在一定的时间后拿出来看，当冰块只剩半颗黄豆大小时就不要再侵入开水了，在空中迅速的摇晃就可以了，这样最终管内的温度一定是0度，对于珍贵细胞。这可以大大提高复苏存活率。并且热水龙头中的水长期处于巴氏印度消毒环境，还能防止细胞污染.不过要好好操作有经验了再用哦！

Asiatic acid 积雪草酸 464-92-6 20mg/支
Madecassic acid 羟基积雪草酸 18449-41-7 20mg/支
β-Sitosterol β-谷甾醇 83-46-5 20mg/支
Capsaicin 辣椒碱 404-86-4 20mg/支
Dihydrocapsaicin 二氢辣椒碱 19408-84-5 20mg/支
Piperine 胡椒碱 94-62-2 20mg/支
Tectorigenin 鸢尾黄素 548-77-6 20mg/支
Tectoridin 鸢尾苷 611-40-5 20mg/支
Schizandrin A 五味子甲素 61281-38-7 20mg/支
Schizandrin B 五味子乙素 61281-37-6 20mg/支

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