转基因品系棉花MON1445探针法qPCR试剂盒检测步骤_技术交流_技术文章

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转基因品系棉花MON1445探针法qPCR试剂盒检测步骤

点击次数：2909 发布时间：2022/8/31 15:56:18

转基因品系棉花MON1445探针法qPCR试剂盒检测步骤：

一、试剂的准备

从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：

试剂每个反应加入的量 N个反应加入的量

荧光PCR反应液 14µL N×14µL

酶混合物 1 µL N×1 µL

总量 15 µL N×15µL

（1）计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10。

.2 qPCR反应条件

将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。

推荐循环条件:

1循环 50℃ for 2 min

预变性 1循环 95℃ for 10 min

PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec

60℃ for 60 sec

在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

CIN-1培养基基础规格: 250g作用：

改良磷酸盐缓冲液规格: 250g作用：

克氏双糖铁琼脂规格: 250g作用：

Skirrow琼脂配套试剂规格: 10支/盒作用：

改良CCD琼脂配套试剂规格: 10支/盒作用：

Bolton肉汤配套试剂规格: 10支/盒作用：

水解酪蛋白胨（MH）琼脂规格: 250g作用：

布氏肉汤规格: 250g作用：

Skirrow琼脂规格: 250g作用：

改良CCD琼脂基础规格: 250g作用：

Bolton肉汤基础规格: 250g作用：

哥伦比亚琼脂培养基规格: 250g作用：

Skirrow琼脂配套试剂规格: 10支/盒作用：

改良CCD琼脂配套试剂规格: 10支/盒作用：

Bolton肉汤配套试剂规格: 10支/盒作用：

水解酪蛋白胨（MH）琼脂规格: 250g作用：

布氏肉汤规格: 250g作用：

Skirrow琼脂规格: 250g作用：

改良CCD琼脂基础规格: 250g作用：

Bolton肉汤基础规格: 250g作用：

哥伦比亚琼脂培养基规格: 250g作用：

试剂盒

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生化试剂

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质粒

生化检测试剂盒

荧光定量PCR试剂盒

生物菌种

细胞

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蛋白/抗体

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