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病毒RNA保存液
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:病毒RNA保存液
英文名称:RNAstable Viral RNA Stable Preservation Solution
产品规格:100mL|500mL
产品货号:GOY-F9669
| 本制品是一种采集病毒时,仅需室温操作,即可迅速抑制RNase并稳定保存病毒样品中RNA的无毒无害液态试剂。本产品为灭活型RNA稳定保存液,广泛用于新鲜病毒样品中RNA的稳定与保存。 本制品使用范围广。本产品主要用于各种病毒样品中RNA的稳定和保存,如血浆、血清、无细胞体液、及细胞培养上清等。本产品不仅适用于普通新鲜样品中RNA的稳定和保存,也适合样品收集后不能够立即进行RNA抽提(包括miRNA等小RNA)的情况,特别适用于野外或临床采集的样品、大批量采集的病毒样品和不能立即冻存样品的RNA稳定与保存。 本制品的效果和液氮冻存的效果一致。本产品可以迅速渗透到细胞内部,完全抑制RNase,避免RNA降解,保持RNA的完整性,从而保存样品中的基因表达谱,并且和液氮一样可以长期保存样品中的RNA。 本制品安全便捷。本产品无任何毒性和刺激性,确保了使用时的安全和便捷。可室温使用,和使用液氮相比,可以有效避免因使用低温的液氮而引起的冻伤、离心管爆裂等安全隐患,并且携带、运输非常方便。 本制品可置于室温保存,有效期一年。 注意事项: 标本采集人员需要按照相关要求做好防护,后续操作应在经认证的中进行,遵循二生物安全等或更高标准。 获得的病毒样品应迅速加入RNAstable试剂中。 本产品适用于新鲜病毒样品中RNA的稳定与保存。样品冻存后再用RNAstable保存的效果会比直接将新鲜样品用RNAstable保存差很多。本产品尽管对于冻存的样品也有一定的稳定保存作用,但更适合新鲜样品。 -20℃或-80℃保存情况下,样品解冻时RNAstable试剂中可能有结晶析出,属正常现象,可待结晶完全溶解后使用,不会影响后续RNA的抽提效果。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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