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动植物组织RNA稳定液
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:动植物组织RNA稳定液
英文名称:Tissue Stabilizer
产品规格:100ml
产品货号:GOY-F9614
| RNA酶广泛存在环境中,很容易降解新鲜采取的动植物组织、血液、体液等样本中的RNA,从而使得研究人员在收集完新鲜样本需要做液氮速冻,或者立即进行RNA的纯化,给研究人员的户外工作带来很多不便。 动植物组织稳定液(Tissue Stabilizer)是门开发用于稳定并保护采集样本内RNA的完整性,一种无毒溶液,可迅速渗入组织,灭活内源RNase。具有以下特点: 1)操作其简便:只需要将新鲜组织切成合适大小(≤0.5 cm)的组织块,浸入5~10倍体积的本品中即可。2)稳定周期长:经本品浸渍的组织/细胞可在37℃保存1天,室温保存1周,4℃保存4周,-20℃/-80℃长期保存。3)下游兼容性广:几乎兼容于所有的RNA分离方法,如Total RNA Extraction Reagent总RNA抽提试剂,以及商业化的几乎所有RNA抽提试剂盒,包括离心柱抽提法,磁珠纯化法等。4)应用性广:可用于多种动植物组织如脑、心脏、、胰脏、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、植物的茎叶等的保存,还可用于酵母、组织培养细胞等。 注意事项 1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2)经本品稳定液处理的样本还可做DNA的提取,甚至蛋白质的提取,但由于本品会变性蛋白质,因此不适合做天然蛋白的提取。 3)本本品稳定液室温保存过程中可能会产生一些沉淀,只需要在使用放到37℃温育片刻,并摇晃使其重溶即可。 4)本本品稳定液仅适用于新鲜组织,不可用于冰冻组织。若需要保护冰冻组织内RNA的稳定性,可使用我司的本品-ICE冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液,即可在将冰冻组织恢复为匀浆用的组织状态,并进行RNA抽提的过程中,维持RNA的稳定性。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
人抗白蛋白抗体(AAA)酶联免疫试剂盒罗丹明6G AR芘 99%华法林
动植物组织RNA稳定液Benzyl 2,4-dihydroxyphenyl ketone
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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