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快速核酸银染试剂盒
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详细内容
| 分子生物学实验中,常利用银染的方法显示聚丙烯酰胺凝胶或者琼脂糖凝胶中的核酸条带,其检测原理是:银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,随后Ag+ 在碱性环境下被还原剂如甲醛还原成银颗粒,后者通过显色可把核酸电泳条带染成黑褐色。该方法检测灵敏度比EB高达200倍,常用于检测SSR标记、SNP标记等。 常规的银染方法由固定、氧化、染色、显影、终止等若干个步骤组成,操作十分繁琐,尤其不适用于大批量实验。而本品的推出可大大改善上述问题,主要体现在:1)快速,整个过程仅需20分钟;2)操作简单,只有染色和显影两步;3)灵敏度跟常规方法相当,比EB高200倍,能检测到10ng的DNA条带。4)两个成分都是现用现配,可重复性好。 按照本方案提供的配制方法,共可配制试剂A和试剂B分别1000ml。 产品组份: 组分名称 规格 试剂A 1 2g 试剂A 2(10×) 100ml 试剂A 3(10×) 100ml 试剂B 1(10×) 100ml 试剂B2 5ml 注意事项: 1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2)银染主要出现在PAGE胶的表面,因此该方法更适合用于薄胶(0.5-0.75mm)的检测。 3)染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40-60 rpm。 4)凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程操作中都应带手套。 5)PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。 6) 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是几步漂洗过程不够彻底,或染色过程温度太低。 7)较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。 8)室温操作时,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。 9)染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。 10)银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。 11)影响硝酸银染色效果的因素很多,其使用容器的材质也是一个非常重要的因素。通常玻璃平皿是理想的银染容器,其化学性质其稳定,几乎不与银染试剂中的任何成分发生反应,且不具有吸附染料的特性。其次是医用搪瓷盘,瓷釉为无机玻璃质材料,能耐各种浓度的无机酸(包括氧化性酸)、有机酸、弱碱和有机溶剂,但不耐酸、碱介质交替使用,而常规银染法就是酸碱介质交替使用,因此搪瓷盘银染效果不如玻璃平皿。塑料种类较多,如果塑料是由含氨基官能团的有机物(脲、三聚氰胺或苯代三聚氰胺)与醛类(主要是甲醛)化合物经缩聚反应而得,则这种塑料会在碱性溶液中与有还原作用的甲醛发生反应,进而使甲醛消耗,减弱银离子与蛋白的结合,降低显色敏感度和显色速度。 |
| 中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 货号 |
| 快速核酸银染试剂盒 | Rapid Silver Stain Kit for Nucleic Acid | 1000ml | GOY-F9609 |
使用方法:
注意:标本采集人员需按有关规定做好个人防护。咽、鼻拭子好在发病的3天采集。
在安全柜内将本产品分装到自备的、螺旋盖内有橡胶圈的5mL旋盖塑料管里(一容器)。
鼻拭子的采集:将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处,停留片刻后缓慢转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入上步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
咽拭子的采集:用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁,将棉签浸入步得到的、装有3mL本产品的旋盖离心管中,弃去拭子尾部,拧紧螺旋盖。
直接在一容器上用油性记号笔写明样本的种类、采样时间、编号、患者姓名。
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封;每袋装一份标本。同时也将标本有关信息填在标本送检表上,连同一容器封于塑料袋内。
将装标本的密封袋放入自备的带螺旋盖内有橡胶圈的塑料容器(二容器)内,拧紧盖,在容器上标明有关信息。同一患者2份以上的密封标本,可以放在同一个二容器内。二容器要承受不少于95 KPa的压力,内衬具吸水和缓冲能力的物质。所有容器必须印有生物危险标注。
将二容器摆放在用运输箱内(或疫苗运输箱),放入冰排,然后以柔软物质填充,并密封,由人(2人)运送,不得邮寄,好使用车。
采集的标本若不能在24小时内送达,则应尽快在⁻⁷0℃以下保存。无⁻⁷0℃条件的,需在4℃冰箱短时间暂存,并尽快联系递送标本。流感病毒在-20℃~-40℃时不稳定,故长期保存好在⁻⁷0℃温度以下进行。
操作程序:
注意:重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2⁻⁷.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗*:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
产品特点:
低温非冻型保存,不破坏病毒的外壳,方便长途运输。
适用于各种拭子样品,包括口腔拭子、鼻腔拭子、咽喉拭子、阴道拭子等。
可以用于H1N1流感病毒和其他任何可以用拭子取样的病毒。
可以用柱式病毒DNA提取试剂盒或柱式病毒RNA提取试剂盒提取病毒核酸。
试剂本身安全环保无毒。
储存条件:常温,有效期一年。
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