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柱式病毒RNA提取试剂盒2.0
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详细内容
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
产品属性:
中文名称:柱式病毒RNA提取试剂盒2.0
英文名称:Column Virial RNA Isolation Kit 2.0
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9606
| 本产品是在柱式病毒RNA提取试剂盒的基础上开发的、门用于从血清(血浆)或其他液体样品中提取微量病毒RNA的升产品。 产品特点: 1.操作简单,整个过程只需要20分钟左右。 2.不需要额外在洗柱液中补加乙醇。 3.灵敏度高,通过RT-PCR检测到的终灵敏度低于50拷贝/mL,比柱式病毒RNA提取试剂盒更高。 4.安全无毒,不需要使用和等有机溶液。 5.如果加上病毒离心富集步骤,多可以处理1.5mL液体病毒样品。 6.与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。 7.价廉物美,性价比远低于国外同类产品。 8.适用于各种材料,包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。 产品组成: 组分 编号 RNA病毒裂解液 BTN3073 柱式病毒RNA提取试剂盒溶液B BTN180602a 离心吸附柱(窄口) BTN60911 通用洗柱液 BTN60408 RNA洗脱液 BTN71207 保存条件:室温保存,有效期一年。 使用方法: 1.在1.5mL离心管中加入0.2mL液体病毒样品(如血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等)。如果病毒需要富集,可以将1.5mL液体在4℃下24000g冷冻离心60分钟,移弃1.3mL后继续操作。 2.加入0.6mL RNA病毒裂解液,振荡30混匀后室温放置10分钟。 ? 注意:RNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀,使用必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。 3.加入0.6mL柱式病毒RNA提取试剂盒溶液B,颠倒混匀。此时离心管中混合液的总体积是1.4mL。 4.将0.7mL混合液将转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。 5.13000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。 6.再将剩余的0.7mL混合液将转移到离心吸附柱中,室温放置2分钟。 7.13000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。 8.加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中,13000g室温离心1分钟,弃收集管中穿透液。 9.13000g室温离心半分钟。 10.在离心吸附柱的滤膜的中部加入30μl RNA洗脱液,然后将离心吸附柱套入一新的1.5mL离心管中,室温放置2分钟。 11.13000g室温离心1分钟,离心管中收集的样品即为RNA溶液。 12.RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应,也可放-80℃长期保存。 |
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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柱式病毒RNA提取试剂盒2.0Betamipron
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