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植物miRNA提取试剂盒
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详细内容
中文名称:植物miRNA提取试剂盒
英文名称:Plant microRNA Extraction Kit
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9587
| 本试剂盒适用于快速提取植物microRNA或者microRNA/总RNA分别提取。采用分提取操作步骤也可单独纯化富集后的microRNA组分和总RNA(>200 nt)从而得到分离富集的microRNA和RNA。试剂盒采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后裂解混合物通过基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA(包括microRNA)被选择性滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 后低盐的RNase free H20将纯净RNA(包括microRNA)从硅基质膜上洗脱。 传统的microRNA提取试剂盒均是采用异硫氰酸胍//(TRIzol法)加高浓度乙醇硅胶膜吸附小片段microRNA的原理方法制成,但是复杂的植物品类如棉花、葡萄、胡杨、冬青、月季、石斛、单参、水稻种子、人参、玉米胚芽等大量样品用TRIzol的原理甚至无法提取符合要求的总RNA,更不用说microRNA。公司采用Trizol法原理的microRNA提取试剂盒面临复杂植物样品时束手无策,产品线中干脆就没有复杂植物microRNA提取试剂盒。用户无奈只好用传统方法,或者TRIzol法提取,用异丙醇/乙醇沉淀方法来提取microRNA,虽然也能提取到部分microRNA,但是沉淀法损失巨大或者和杂质共沉淀,影响实验结果,在国际刊物投稿时常常面临质疑,甚至论文被撤销。而本试剂盒在公司全球先数百种复杂植物提取的经验基础上(包括人参、雪莲、棉花、胡杨、冬青等各种复杂植物),创新性的采用了不用,的技术路线全球家解决该问题,可以提取绝大多数复杂植物如棉花、杨树、冬青、月季、丹参等植物microRNA,当然本试剂盒也适用于拟南芥、水稻、小麦、烟草、水稻等各种简单样品。 产品组分: 用裂解液—————————50ml 植物RNA助提剂———————5ml Wash Solution 1——————12ml Wash Solution 2/3—————10ml RNase-free H2O——————10ml 基因组DNA清除柱和收集管——50套 吸附柱和收集管———————50套 产品特点: 1. 完全不使用有毒的,等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 2. 快速,简捷,单个样品操作一般可在30分钟内完成。 3. 独特的植物RNA助提剂可以有效结合多糖多酚,提高清除效果。 4. 多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
凝血酶原体蛋白(PIVKA-II)酶联免疫试剂盒正 ACS, ≥99.5%2,7-二溴芴 98%睾酮,素
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