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RNA/mircoRNA/DNA/蛋白分提试剂盒
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详细内容
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
产品属性:
中文名称:RNA/mircoRNA/DNA/蛋白分提试剂盒
英文名称:AllExtract Tissue/Cells RNA/mircoRNA/DNA/Protein Isolation Kit
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9585
| 本试剂盒用于快速从动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA、总RNA和蛋白(如选购microRNA吸附柱和配套溶液,还可以将同一个样品的总RNA中的microRNA分离并提取,富集microRNA)。得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。 本试剂盒采用独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNase、DNase,然后裂解混合物通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA和蛋白穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗、离心后,洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上,再通过一系列快速的漂洗、离心洗脱得到纯RNA。滤液经选择性沉淀得到蛋白。 试剂盒特点: 完全不使用有毒的,等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速,简捷,单个样品总RNA、基因组DNA和蛋白分离操作一般可在1小时内完成。 独特的吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 多次柱漂洗确保RNA、基因组DNA高纯度,可直接用于下游各种实验。 试剂盒组成: 组分 规格 裂解液RLT Plus 50mL Wash Solution 1 12mL Wash Solution 2/3 10mL RNase-free H2O 10mL 抑制物去除液IR 25mL 漂洗液WB 15mL 缓冲液APP 60mL 洗脱缓冲液EB 10mL 基因组DNA吸附柱DA和收集管 50套 RNA吸附柱RA和收集管 50套 保存:RT,有效期12个月 保存注意事项: 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。 不合适地保存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15~25℃)进行。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项: 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 样品处理量绝对不要过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,过5mg就会过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,过3×106细胞就会过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不过3~4×106,组织不过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、Wash solution 1、Wash solution 2/3中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 该试剂盒如需要用于植物样品尤其是多糖多酚次代谢产物丰富的困难样品的DNA、RNA提取,请咨询我司技术人员,可能需要用到其它试剂。 额外购买microRNA吸附柱子和配套溶液,还可以将同一个样品的总RNA和microRNA分离并提取,富集microRNA。如有需要请咨询我公司。 关于DNA的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留),本公司的AllExtract组织细胞RNA/DNA/蛋白分提试剂盒,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时: 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 |
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
皮质酮(CORT)酶联免疫试剂盒异戊 分子生物学,>99%(GC)糠酸 98%泊酚
RNA/mircoRNA/DNA/蛋白分提试剂盒6-Aminopenicillanic acid
注意事项:
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
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