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TRIzol试剂伴侣
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详细内容
中文名称:TRIzol试剂伴侣
英文名称:TRIzol-Mate
产品规格:50次
产品货号:GOY-F9537
| TRIzol是用于总RNA提取(主要是动物总RNA提取)的产品,具有广大的客户群。但其缺点之一是一直没有柱式升产品,客户仍然要使用既繁琐又费事的非柱式操作(另一缺点是不能用于富含多糖和多酚的材料)为解决此问题 产品特点: 1. RNA 质量更好,因为操作简短减少了RNA在提取过程中的降解。 2. RNA 纯度更高,OD260/OD280一般在 1.9以上,比经典 TRIzol法得到的更纯。 3. 门的洗涤条件能有效去除基因组 DNA,进一步减少其对 RNA的污染。 4.适用于其他基于酸酚/ 异硫氰酸胍提取原理的RNA提取产品,包括TRIzol、TRIzol LS、TRI Reagent等。 5.可以省略处理步骤,避免接触有毒试剂(但效果稍差)。 6.跟TRIzol 结合使用,把经典操作变成了柱式操作,简化了实验流程,用户可以节约30分钟的时间。 使用方法: 1. 按 TRIzol的使用说明书进行总 RNA提取到加之一步。 2. 如果需要加,则继续按TRIzol的使用说明书操作,用处理裂解液离心后得到上清液。如果省略处理步骤,则需要将裂解物直接离心。 3. 将经过处理得到的上清液或没有经过处理直接离心得到的裂解液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:如果是经过处理,则离心后,下层有机相和中间层将含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。 4. 加入等体积的溶液A,颠倒混匀 30。 5. 根据混合物的多少,一次或分两次转移到离心吸附柱中。 6. 每次转移后,需要13000-15000g室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。 7. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中,室温离心半分钟,弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。但如果样品OD260/280 比值不高,可以再用0.3mL 通用洗柱液重复此步一次。 8.室温离心半分钟。此步对去除残留通用洗柱液十分重要,否则残留的通用洗柱液会影响RNA的质量和使用。 9. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中,加入50-100μl RNA 洗脱液。 10.室温离心半分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。 11. RNA 完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。 12. RNA产量产率测定:将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度 X 体积)和产率(RNA产量/组织用量)。 13. RNA 纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。 |
1) 由于细胞凋亡是一个快速的过程,建议样品在染色后1小时之内进行分析。
2) 对于贴壁细胞,消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞,需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。处理贴壁细胞时要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。*消化时间过短,细胞需要用力吹打才能脱落,容易造成细胞膜的损伤,PI摄入过多;消化时间过长,细胞膜同样易造成损伤,甚至会
影响细胞膜上磷脂酰*与Annexin V-FITC的结合。消化时将*铺满孔板底后,轻摇时*与细胞充分接触,然后倒掉大部分*,利用剩余的少量*再消化一段时间,待细胞间空隙增大,瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用EDTA,EDTA会影响Annexin V与PS的结合。
3) 实验中如需要固定细胞,比如在检测凋亡的同时检测细胞周期,只能选用Annexin V-FITC,而不能选用Annexin V-EGFP,因为在固定过程中EGFP会变性导致丧失激发荧光的能力。固定需要先将细胞与Annexin V-FITC进行孵育,并用binding buffer洗掉未结合的Annexin V-FITC。因为固定过程中细胞通透性增加会产生细胞碎片,可以和Annexin V结合,对结果产生干扰。
4) 如果样品来源于血液,请务必除去血液中的血小板。因为血小板含有PS,能与Annexin V结合,从而干扰实验结果。可以使用含有EDTA的缓冲剂并在200 g离心洗去血小板。
5) 试剂在开盖请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
6) Annexin V-FITC和PI是光敏物质,在操作时请注意避光。
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之必须预热。
2.在适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用*和的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的异戊醇(*—异戊醇=25:24:1),异戊醇的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
操作流程:
1.根据要保存的各样本的体积,计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍(如100mg组织约用1ml RNAwait);离心收集2×106细胞RNAwait的用量是1ml。
2. 将RNAwait按需要量分装入自备保存管中;
3. 快速将较大的组织切成厚度<0.5 cm的任意片状,立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0.5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入,组织中间部位的RNA不能受到保护。较小的组织(如大鼠的肾脏、脾脏,小鼠的大部分器官)取下后可以直接浸入RNAwait。
4. 保存时先将样本浸入RNAwait后置4℃冰箱过夜(4℃过夜是必需的,这样可使RNAwait完全渗入到组织中),然后转移到-20℃冰箱(RNAwait在-20℃时仍为液态,有结晶析出,是正常情况);或者在4℃冰箱过夜后,从RNAwait中取出组织块,转移到-80℃冰箱。在RNAwait中保存的标本,反复冻融至室温20次不影响RNA的质量。
胰抑制素(Pancreastatin)酶联免疫试剂盒葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)间硝苯 GR,99.0%醋酸M肽
TRIzol试剂伴侣Lincomycin
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