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JAK2和STAT3抑制剂(WP1066)
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:JAK2和STAT3抑制剂(WP1066)
英文名称:WP1066
产品规格:1mL(10mM)|10mg|50mg
发货周期:1~3天
WP1066是一种新颖的JAK2和STAT3抑制剂,对STAT5和ERK1/2也起作用,但对JAK1和JAK3没有影响。
注:本品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他用途!
CAS号:857064-38-1
纯度:99.67%
分子量:356.22
储存条件:-20℃,有效期2年,溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. 避光保存及使用。
3. 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
无水草 99.999% metals basisAnti-5-HTR2B/FITC 荧光素标记5-羟色受体2B(5-HT/serotonin R2B)抗体IgG小鼠末端运动神经元生存蛋白1(SMN1)酶联免疫吸附测定试剂盒
无水草 99.99% metals basisAnti-5-HTR3/FITC 荧光素标记5-羟色受体3抗体IgG小鼠突触素(SYP)酶联免疫吸附测定试剂盒
1-重氮-2-萘酚-4-磺 98%Anti-5-HTR4/FITC 荧光素标记5-羟色受体4抗体IgG小鼠突触体相关蛋白25(SNAP-25) 酶联免疫吸附测定试剂盒
肼黄 Biological stainAnti-5-LOX/FITC 荧光素标记5-脂氧合酶抗体IgG小鼠突触结合蛋白1(SYT1)酶联免疫吸附测定试剂盒
肼黄 85%Anti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser271) /FITC 荧光素标记化5-脂氧合酶抗体IgG小鼠多配体聚糖4(SDC4)酶联免疫吸附测定试剂盒
柯衣定 ARAnti-Phospho-5-Lipoxygenase (Ser663) /FITC 荧光素标记化5-脂氧合酶抗体IgG小鼠突触核蛋白α(SNCa)酶联免疫吸附测定试剂盒
香紫苏内酯 97%Anti-5-HTT/SERT/FITC 荧光素标记5-羟色转运蛋白抗体IgG小鼠速激肽受体1(TACR1)酶联免疫吸附测定试剂盒
S-联萘酚 99%Anti-8-OHdG/FITC 荧光素标记兔抗8-羟脱氧鸟苷蛋白抗体IgG小鼠速激肽受体2(TACR2)酶联免疫吸附测定试剂盒
双(二膦) 98%Anti-AACT-Alpha1 /RBITC 红色荧光素罗丹明标记α-1抗胰糜蛋白酶IgG小鼠踝蛋白(TLN)酶联免疫吸附测定试剂盒
1,2-双(二膦)乙烷 98%Anti-AACT-Alpha1/FITC 荧光素标记α-1抗胰糜蛋白酶小鼠TH糖蛋白(THP)酶联免疫吸附测定试剂盒
1,1'-双(二-叔丁膦)二茂铁 98%Anti-AAK1/FITC 荧光素标记AP2关联激酶1抗体IgG小鼠TAR DNA结合蛋白43(TDP43)酶联免疫吸附测定试剂盒
1,5-双(二膦)戊烷 97%Anti-AARS2/FITC 荧光素标记氨酰tRNA合成酶2抗体IgG小鼠抗性酶5b(TRACP-5b)酶联免疫吸附测定试剂盒
1,6-双(二膦)己烷 97%Anti-AARS2 /FITC 荧光素标记氨酰tRNA合成酶2抗体IgG小鼠TATA结合蛋白(TBP)酶联免疫吸附测定试剂盒
1,1'-双(二膦)二茂铁 97%Anti-AAT/FITC 荧光素标记α-1抗胰蛋白酶抗体IgG小鼠TATA框结合蛋白相关因子1(TAF1)酶联免疫吸附测定试剂盒
双(三膦)化铵 96%Anti-AATF/FITC 荧光素标记拮抗凋亡转录因子抗体IgG小鼠TATA框结合蛋白相关因子2(TAF2)酶联免疫吸附测定试剂盒
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