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AO-EB双染色试剂盒
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:AO-EB双染色试剂盒
英文名称:Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit
产品规格:50ml*2|250ml*2
发货周期:1~3天
橙能透过胞膜完整的细胞,嵌入细胞核DNA,与双链DNA结合后发出绿色荧光,溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞,嵌入核DNA,发橘红色荧光。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察,可见四种细胞形态:活细胞(VN),核染色质着绿色并呈正常结构;早期凋亡细胞(VA),核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状;晚期凋亡细胞(NVA),核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状;非凋亡的死亡细胞(NVN),核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB 溶液浓度分别为100ug/ml,所含稳定剂不影响实验效果。
使用方法:(仅供参考)
1、使用先根据用量,将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液,现用现配。
2.1、对于贴壁细胞或爬片,去掉培养基,用 PBS 洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞,加入新的 PBS;如果需要观察全部细胞特性,保留未贴壁细胞,可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后,用 PBS 洗 2 次,除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
2.2、对于悬浮细胞,可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后,离心去除工作液,后用 PBS 洗 2 次,除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
3、建议用蓝光激发,视野下可以观察到死细胞呈现红色,活细胞呈现绿色。
保存:4℃避光密封保存,有效期一年。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
蜕皮激素 分析标准品,≥95% (HPLC)人过氧化脂质(LPO)免疫试剂盒8号染色体开放阅读框4抗体Phospho-EGFR (Tyr998) 化表皮生长因子受体抗体
蜕皮激素 ≥93% (HPLC), 粉末人过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)免疫试剂盒CD73抗体Phospho-EGFR (Tyr992) 化表皮生长因子受体抗体
蜕皮激素 ≥95% (HPLC), 粉末人过氧化物酶体增殖激活物受体γ辅激活因子1α(PPARGC1)免疫试剂盒轴突相关粘附分子抗体phospho-EGFR (Tyr869) 化表皮生长因子受体抗体
芍药苷 分析标准品,≥98%人过氧化氢酶(CAT)免疫试剂盒6型胶原蛋白α5抗体phospho-EGFR (Tyr1197) 化表皮生长因子受体抗体
芍药苷 ≥98% (HPLC)人果糖二缩酶A(ALDOA)免疫试剂盒神经粘附分子CALL抗体Phospho-EGFR (Tyr1172) 化表皮生长因子受体抗体
仲丁 standard for GC, ≥99.8% (GC)人果糖(FRA)免疫试剂盒中性粒杀菌蛋白BP30抗体phospho-EGFR (Tyr1172) 化表皮生长因子受体抗体
仲丁 99.5%,无水人广州管园线虫抗体(IgM)免疫试剂盒21号染色体开放阅读框56抗体Phospho-EGFR (Tyr1138) 化表皮生长因子受体抗体
仲丁 99%人广州管园线虫抗体(IgG)免疫试剂盒T淋巴CD1抗体phospho-EGFR (Tyr1125) 化表皮生长因子受体抗体
仲丁 CP,99%人广谱角蛋白(P-CK)免疫试剂盒角蛋白5抗体phospho-EGFR (Tyr1110) 化表皮生长因子受体抗体
仲丁 分析标准品,≥99.9% (GC)人胱抑素SN(CST1)免疫试剂盒补体C9a抗体Phospho-EGFR (Tyr1101) 化表皮生长因子受体抗体
异 AR, ≥99.5% 人胱抑素F(CST7)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框141抗体phospho-EGFR (Tyr1092) 化表皮生长因子受体抗体
叔丁 分析标准品,>99.8%(GC)人胱抑素B(CSTB/CST6/STFB)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框160抗体phospho-EGFR (Tyr1068) 化表皮生长因子受体抗体
叔丁 HPLC,>99.5%(GC)人胱抑素A(CSTA/STF1/STFA)免疫试剂盒亲环蛋白(亲环素)40抗体phospho-EGFR (Tyr1016) 化表皮生长因子受体抗体
叔丁 GR,≥99.5% (GC)人胱天蛋白酶激活的脱氧核糖核酶(CAD)免疫试剂盒T调控相关蛋白抗体phospho-EGFR (Thr693) 化表皮生长因子受体抗体
叔丁 AR人胱天蛋白酶9(Casp-9)免疫试剂盒突触后蛋白CRIPT抗体Phospho-EGFR (Thr678) 化表皮生长因子受体抗体
AO-EB双染色试剂盒22号染色体开放阅读框29抗体Human CCDC158 (Coiled-coil domain-containing protein 158) ELISA Kit人钙调素(CAM)ELISA试剂盒, CAM ELISA
神经表面蛋白F3Human CBP20 (NCBP 20 kDa subunit) ELISA Kit人列腺素F(PGF)ELISA试剂盒,PGF ELISA
组织蛋白酶C抗体Human CCDC83 ELISA Kit人列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒,PSA ELISA
半胱酸蛋白酶蛋白-4抗体Human CCDC25 (Coiled-coil domain-containing protein 25) ELISA Kit人环加氧酶2(COX-2)ELISA试剂盒,
活化半胱酸蛋白酶蛋白3抗体Human CCKBR(Gastrin/cholecystokinin type B receptor) ELISA Kit人β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA试剂盒,
7号染色体开放阅读框61抗体Human CCNI2 ELISA Kit人基膜聚糖/内腔蛋白(LUM)ELISA试剂盒,
少突胶质跨膜蛋白抗体Human CAMK2D(CaMKII delta) ELISA Kit人维生素K1(VK1)ELISA试剂盒,
激分子B7-1蛋白抗体Human CaMKIV (Calcium/calmodulin-dependent protein kinase type IV) ELISA Kit人纤溶酶原激活剂(PLGA)ELISA试剂盒,
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