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Caspase-6活性测定试剂盒
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:Caspase-6活性测定试剂盒
英文名称:Caspase-6 Activity colorimetric assay Kit
产品规格:20T|50T|100T
发货周期:1~3天
本试剂盒测定哺乳动物组织、细胞caspase-6活性。试剂盒测定原理基于Caspase-6特异水解其多肽底物Ac-VEID-pNA(N-acetyl-Val-Glu-Ile-Asp-p-nitroanilide),释放出游离的硝基pNA,后者呈黄色在405nm具有大吸收峰,用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-6的水解活性。
Caspase-6也称Mch-2,其体蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚体,可诱导细胞凋亡。细胞凋亡属于程序化细胞死亡,可见于各种器官和细胞,在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。Caspase-6也称Mch-2,其体蛋白被granzyme B剪切后形成活化的caspase-6二聚体,可诱导细胞凋亡。Caspase-6可剪切凋亡的关键调节蛋白PARP,剪切核膜上关键蛋白Lamin A,其对于Lamin A的识别位点是VEID。
运输及保存:试剂常温运输。到达后按要求储存,1年内稳定。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
6-氨烟 AR人己糖激酶(HK)免疫试剂盒19号染色体开放阅读框46抗体phospho-GABRG2(Ser327) 化γ氨丁γ2受体抗体
1,1,2-三三氟乙烷(CFC-113 for HPLC, ≥99.5%人几丁质酶3样蛋白1(YKL-40/CHI3L1)免疫试剂盒原癌因cMAF抗体phospho-GABBR2 (Ser892) 化G氨丁B型受体2抗体
1-乙酰萘 97%人几丁质酶1(壳三糖酶)(CHIT1)免疫试剂盒电压依赖性钙通道Cav2.1抗体phospho-GABBR2 (Ser783) 化G氨丁B型受体2抗体
N,N-二乙乙二 98%人集蛋白亚家族成员11(COLEC11)免疫试剂盒L型钙通道蛋白a1亚型3抗体phospho-GABBR1 (Ser923) 化gamma氨丁B型受体1抗体
二乙氨乙 99.5%人低密度脂蛋白(VLDL)免疫试剂盒L型钙通道蛋白a1亚型6抗体phospho-GAB2(Ser623) 化接头蛋白Gab2抗体
N,N-二丁 98%人激肽释放酶8(KLK 8)免疫试剂盒色素P450 2B6抗体phospho-GAB2 (Tyr643) 化接头蛋白Gab2抗体
二异 CP,98%人激肽释放酶7(KLK 7)免疫试剂盒化β链接素相互作用蛋白1抗体phospho-GAB2 (Tyr452) 化接头蛋白Gab 2抗体
N,N-二异乙 99%人激肽释放酶6(KLK 6)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框62抗体phospho-GAB2 (Ser623) 化接头蛋白Gab 2抗体
N,N-二异乙二 97%人激肽释放酶2(hK 2)免疫试剂盒凋亡抑制因子1抗体Phospho-Gab1 (Tyr659) 化接头蛋白Gab 1抗体
四氢氧化铵 AR,25%水溶液人激肽释放酶11(KLK 11)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框27抗体Phospho-Gab1 (Tyr627) 化接头蛋白Gab 1抗体
原酯 98%人激肽释放酶10(KLK 10)免疫试剂盒酯酶抑制蛋白C1IN抗体phospho-G3BP1(Ser232) 化Ras GTP酶活化蛋白结合蛋白1抗体
4-羟酰肼 98%人激肽释放酶1(KLK 1)免疫试剂盒色素P450 2W1抗体phospho-FXYD1 (Ser88) 化神经膜抗体
草酰乙 98%人激素敏感性脂肪酶(HSL)免疫试剂盒胆碱脱氢酶抗体phospho-FXYD1 (Ser83) 化神经膜抗体
无水草 anhydrous, 99.0%人激动异构酶/分裂素MB(CKMB)免疫试剂盒因子诱导凋亡抑制因子1phospho-FSCN1(Ser39) 化纤维束蛋白同源物1抗体
无水草 AR,98%人质衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)免疫试剂盒亲环蛋白PPIB抗体phospho-FRS2(Tyr436) 化成纤维生长因子受体底物2抗体
Caspase-6活性测定试剂盒肉碱棕榈酰基转移酶1A抗体Human CLEC10A/CD301 ELISA Kit肉汤琼脂培养基 药品卫生检验,细数测定,无试验
分化周期CDC42蛋白抗体Human CPOX(Coproporphyrinogen oxidase) ELISA Kit胡黄连苷II Amphicoside II
磷酸化分化周期CDC42蛋白抗体Human CIN85 ELISA Kit二苯基羰酰二肼
环化酶相关蛋白CAP-2抗体Human CREB1 ELISA Kit派洛宁B
阶段特异性胚胎表面抗原-1抗体Human CKAP4 ELISA Kit邻苯二酚紫
20号染色体开放阅读框202抗体Human CKS2 ELISA KitDEAE葡聚糖凝胶A-25
粘膜相关上皮趋化因子28抗体Human Cortactin ELISA Kit人角蛋白18(CK-18)ELISA试剂盒, CK-18 ELISA kit
癌胚抗原单克隆抗体(包被)Human Claudin 23 ELISA Kit人天门冬氨酸转氨酶/谷草转氨酶(GOT/GPT)ELISA试剂盒, GOT/GPT ELISA k
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