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细胞周期检测试剂盒
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详细内容
中文名称:细胞周期检测试剂盒
英文名称:
产品规格:20T|50T|100T
发货周期:1~3天
细胞周期(cell cycle)是指细胞从一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程,通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期组成。G1 期:细胞开始RNA和蛋白质的合成,但DNA含量仍保持二倍体。S 期:DNA 开始合成,这时细胞核内DNA的含量介于G1 期和G2 期之间。当DNA 复制结束成为4倍体时,细胞进入G2 期。G2 期的细胞继续合成RNA及蛋白质,直到进入M 期。因此,单纯从DNA含量无法区分G2 期和M 期。一旦有丝分裂发生,细胞分裂成两个细胞,这两个细胞或者进入下一个细胞周期,或者进入静止期(G0期),而G0 期从DNA含量上同样无法与G1 期区分。因此,整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M 期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%、S%、G2/M%,了解增殖能力,在肿瘤病理学研究中,通常以S 期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
PI 为插入性核酸荧光染料,能选择性的嵌入核酸DNA和RNA 双链螺旋的碱基之间与之结合,其结合的量与DNA的含量成正比例关系,用流式细胞仪进行分析,就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态,从而计算出各个期的百分含量。PI染色后,假设G0/G1期细胞的荧光强度为1,那么含有双份基因组DNA的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2,正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1-2 之间。
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA 能够和荧光染料结合的特性,细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同,流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
储存条件:-20℃避光保存。
有效期:一年。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
3,4-二氟 98%人抗底节(BG)自身抗体免疫试剂盒紧密连接蛋白19抗体phospho-KLF5(Ser311) 化肠道内富含的Kruppel样因子5抗体
2,3-二氟 98%人抗肌内膜抗体(EMA)(IgA)免疫试剂盒紧密连接蛋白18抗体phospho-KLF5(Ser275) 化KLF5抗体
3,5-二氟 97%人抗肌内膜(EMA)抗体(IgG)免疫试剂盒紧密连接蛋白17抗体phospho-KLF5(Ser272) 化KLF5抗体
1,4-环己二酮单乙二缩酮 98%人抗肌集钙蛋白抗体(IgG)免疫试剂盒紧密连接蛋白16抗体phospho-Kidins220 (Ser918) 化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体
1,4-二 98%人抗肌动蛋白抗体(AAA)免疫试剂盒CELF3蛋白抗体phospho-KCND2/Kv4.2(Thr607) 化电压门控性通道蛋白Kv4.2抗体
2,3-二氟 97%人抗黄体生成素抗体(Anti LH Ab)免疫试剂盒钙粘蛋白超家族CELSR1抗体phospho-KCND2/Kv4.2(Thr602) 化电压门控性通道蛋白Kv4.2抗体
3,4-二氟 97%人抗环胍氨肽(CCP)抗体免疫试剂盒牙骨质蛋白1抗体phospho-KCNC1(Ser503) 化离子通道蛋白Kv3.1抗体
对乙 97%人抗琥珀脱氢酶黄素亚单位抗体(IgG)免疫试剂盒CENPBD1蛋白抗体phospho-JUP(Tyr550) 化γ连环蛋白抗体
4-乙氧乙酮 98%人抗呼吸道合胞病抗体(RSV IgM)免疫试剂盒着丝粒蛋白I抗体phospho-JunD(Ser255) 化活化蛋白激酶D抗体
4-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗体免疫试剂盒着丝粒蛋白J抗体phospho-JunB(Ser79) 化活化蛋白激酶B抗体
3-乙炔 98%人抗呼吸道合胞病(RSV)抗体(IgG)免疫试剂盒着丝粒蛋白L抗体phospho-JunB(Ser259) 化活化蛋白激酶B抗体
4-乙联 97%人抗红抗体(RBC)免疫试剂盒着丝粒蛋白M抗体Phospho-JunB (Thr102/Thr104) 化活化蛋白激酶B抗体
4-乙环己酮 98%人抗核周因子(APF)抗体免疫试剂盒着丝粒蛋白N抗体phospho-JNK1/2/3(Thr183+Thr185) 化氨末端激酶1/2/3抗体
4-乙乙炔 98%人抗核小体抗体IgG(AnuA-IgG)免疫试剂盒着丝粒蛋白Q抗体Phospho-Jak3 (Tyr980/981) 化蛋白酪氨激酶JAK-3抗体
4-戊乙炔 97%人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)免疫试剂盒CENTB2蛋白抗体Phospho-Jak3 (Tyr785) 化蛋白酪氨激酶JAK-3抗体
细胞周期检测试剂盒几丁质酶3样蛋白3抗体Human EFHD1 ELISA Kit人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)ELISA试剂盒,
趋化素样因子超家族成员2抗体Human EIF3C ELISA Kit人巨噬激蛋白(MSP)ELISA试剂盒,
趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体Human EFTUD1 ELISA Kit小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)ELISA试剂盒,
18号染色体开放阅读框1抗体Human EFS ELISA Kit小鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)ELISA试剂盒,
色素c氧化酶VIIA亚型2抗体Human EFTUD2 ELISA Kit小鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒,
钙离子通道a1F亚型抗体Human EFHA1 ELISA Kit小鼠孕/孕酮(PROG)ELISA试剂盒,
钙调磷酸酶B亚基B1抗体Human EFHC1 ELISA Kit小鼠甲基化酶(Methylase)ELISA试剂盒,
钙调蛋白激酶激酶α抗体CaMKKαHuman EIF1 ELISA Kit小鼠促甲状腺素释放(TRH)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
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