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Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/11/6 10:01:29
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详细内容
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中文名称：Annexin V-APC/7-AAD细胞凋亡检测试剂盒
英文名称：
产品规格：50T|100T
发货周期：1～3天
产品背景：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。
AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS 高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之，这使得Annexin V 与PS的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。
检测原理：
在正常的活细胞中，磷脂酰丝氨酸(phosphotidylserine，PS)位于细胞膜的内侧，但在早期凋亡的细胞中，PS 从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。
Annexin-Ⅴ能与PS 高亲和力结合。可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。用标记了APC的AnnexinⅤ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤，坏死的细胞会结合Annexin V-APC。
Annexin V-APC 通常与细胞膜非渗透性核酸荧光染料联合使用以检测凋亡细胞。常用的染料是7-AAD。正常细胞和早期凋亡细胞的细胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，7-AAD 能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。
7-AAD/Annexin V-APC试剂盒将Annexin Ⅴ与7-AAD匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与Annexin V-APC和7-AAD 结合显色，而7-AAD 则被排除在活细胞(APC阴性)和早期凋亡细胞(APC阳性)之外。在没有巨噬细胞的情况下，凋亡的后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体，从而使凋亡晚期的细胞也同时被APC和7-AAD 结合染色呈现双阳性。
储存条件：染色液2-8℃避光保存；结合液2-8℃保存；长期不用-20℃保存。
Annexin V-APC染色液避免反复冻融，冻融2次以上可能会失效。长期保存分装后-20℃保存。
有效期：一年。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
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香草 98%人膜联蛋白Ⅱ(ANX-Ⅱ)免疫试剂盒猪圆环病Ⅱ型衣壳蛋白phospho-PRL(Ser163) 化泌素抗体
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反式-1，2-环己二四乙,一水 99%人膜攻击复合物(MAC)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白69抗体phospho-PRKD1(Ser742) 化蛋白激酶C mu型抗体
卡铂 98%人膜辅蛋白(MCP/CD46)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白98抗体phospho-PRKD1(Ser738) 化蛋白激酶C mu型抗体
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注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
热门标签：Annexin,V-APC/7-AAD细胞凋亡检测,试剂盒
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