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ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒
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详细内容
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒
英文名称:Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
产品规格:20T|50T||100T
发货周期:1~3天
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一种分子量为35.8 KD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)高亲和力特异结合。FITC-Annexin V 结合到凋亡细胞后,在蓝色光的激发下,发出绿色荧光,区分出凋亡细胞与正常细胞。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)是一种核酸染料,它不能穿透完整细胞膜,但对凋亡晚期细胞和死细胞的破损细胞膜能够穿透,并使细胞核红染。将FITC-Annexin V 与PI 匹配使用,可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞区分开来。
储存条件:2~8℃,有效期一年
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
氟化,无水 GR,粉末人双氢睾酮(DHT)免疫试剂盒化热休克蛋白β5/α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体PIK3CA 脂酰肌激酶催化亚单位A抗体
钠 GR,99.5%人衰变加速因子(DAF/CD55)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框167抗体PIK3C3/PI3 kinase type 3 脂酰肌激酶3催化亚单位3抗体
氟化钠 99.99% metals basis人输血传播病/辛型肝炎病抗原免疫试剂盒1号染色体开放阅读框168抗体PIH1D1/NOP17 核仁同源蛋白17抗体
氟化钠 分析标准品,99.93%人输血传播病(TTV)/辛型肝炎病抗体免疫试剂盒1号染色体开放阅读框170抗体PIGR 多聚免疫球蛋白受体抗体
氟化钠 SP人输卵管特异性糖蛋白(OVGP1)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框172抗体PIGA 红脂酰肌聚糖A抗体
氟化钠 PT人瘦素(LEP)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框173抗体PIG3/TP53I3 p53诱导蛋白3抗体
氟化钠 ACS, ≥99%人受体型酪氨蛋白酶样N(PTPRN)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框174抗体pig cholerae salmonella 猪霍乱沙门氏菌抗体
氟化钠 AR,98%人受体TNFRSF结合丝氨苏氨激酶2(RIPK2)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框177抗体PID1 相互作用结构域蛋白1抗体
氟化钠 昆虫培养, ≥99%人嗜伊红颗粒主要碱性蛋白(EMBP/MBP)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框180抗体PICK1 蛋白激酶Cα相互作用蛋白1抗体
缩节 分析标准品人嗜性粒阳离子蛋白(ECP)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框182抗体PIBF1/C13orf24 孕酮诱导阻断因子1抗体
缩节 98%人嗜粒趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框183抗体PIBF 孕激素诱导阻断因子抗体
阿斯巴甜 98%人嗜肺军团菌抗原(LP Ag)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框187抗体PI3K/PI3 kinase p85 alpha subunit 脂酰肌激酶抗体
1,2,3,4-丁烷四羧 99%人视黄免疫试剂盒1号染色体开放阅读框189抗体PI3 Kinase p110 delta 脂酰肌激酶催化亚单位D抗体
DL-苹果 CP,99%人食欲素受体(OXR)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框190抗体PI3 Kinase p110 beta 脂酰肌激酶(PI3Kβ)抗体
DL-苹果 AR,99.5%人食欲素/阿立新B(OX-B)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框192抗体PI 3 Kinase p85 beta 脂酰肌激酶p85β抗体
ANNEXIN V- FITC/PI凋亡检测试剂盒促凋亡调节蛋白BNIP3抗体Human FUT11 ELISA KitFMOC-L-缬氨酸
骨形态发生蛋白2受体抗体Human FUT4 ELISA KitD-半胱氨酸盐酸一水化合物
甲状腺受体共激活蛋白抗体Human FUT7 ELISA Kit2,3-二氨基萘
磷酸化促凋亡Bik蛋白抗体Human FUT8 ELISA Kit人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒, SP-D ELISA kit
蛋白酪氨酸激酶BAP135抗体Human FUT9 ELISA Kit人叶酸(FA)ELISA试剂盒,FA ELISA
磷酸化相关死亡促进因子抗体Human FUT7 ELISA Kit人胱天蛋白酶3(Casp-3)ELISA试剂盒,
磷酸化Bax抗体Human FRZB ELISA Kit人血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒,
Bcl-10抗体Human FSD1L ELISA Kit小鼠CD19分子(CD19)ELISA试剂盒,
热门标签:ANNEXIN,V-,FITC/PI凋亡检测,试剂盒













