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线粒体提取试剂盒
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详细内容
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中文名称:线粒体提取试剂盒
英文名称:
产品规格:50T|100T
发货周期:1~3天
线粒体提取试剂盒用于从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于动物软组织(肝或脑组织)和硬组织(肌肉)以及培养细胞的线粒体的制备。其制备物产量高,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。
操作步骤:
1. 样本处理:
a. 组织匀浆:称取100~200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等,PBS或生理盐水冲洗,洗净血水,滤纸吸干,用剪刀剪为碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer,0℃冰浴上下研磨组织20次;
b. 培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800g离心5~10 min收集细胞,计数。每次提取需要5×107个细胞,加入1.0 mL冰预冷的Lysis Buffer重悬细胞,将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内,0℃冰浴研磨30~40次。
2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4℃,1000g 离心5 min。
3. 取上清,转移至新的离心管中,4℃,1000g再次离心5 min。
4. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
5. 往线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000 g 离心5 min。
6. 取上清,转移至新的离心管中,4℃, 12,000 g 离心10 min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底。
7. 用50 -100μL Store Buffer 或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或⁻⁷0℃保存。
储存条件:-20℃
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
9,9-二-2,7-二溴芴 98%人羰还原酶[NADPH] 1(CBR1/CBR/CRN)免疫试剂盒原癌蛋白CBL2抗体PLGF/PIGF (mouse, rat, pig) 胎盘生长因子抗体(小鼠、大鼠、猪)
2,7-二溴芴 98%人碳酐酶9(CA9)免疫试剂盒信号调节蛋白α抗体PLGF/PIGF (human) 胎盘生长相关抗体(人)
2,6-二-γ-吡喃酮 99%人碳酐酶6(CA-6)免疫试剂盒信号淋巴活化分子CD150抗体PLGF 胎盘生长因子抗体
2,7-二溴芴酮 96%人碳酐酶3(CA3)免疫试剂盒巨噬炎性蛋白16抗体Plexin B2 神经丛蛋白B2抗体
2,6-二-4H-4-亚吡喃二 98%人碳酐酶2(CA-2)免疫试剂盒果蝇CG6856-PA抗体Plexin B1 神经丛蛋白B1抗体
3-己噻吩 98%人碳酐酶12(CA-12)免疫试剂盒色素c氧化酶COX7A2抗体Plexin A2 神经丛蛋白A2抗体
2-氧-5-(2′-乙已氧)对二 98%人碳酐酶(CA)免疫试剂盒剪切和多聚腺苷化特异性因子4抗体Plexin A1 神经丛蛋白A1抗体
N,N′-二-N,N′-(1-萘)-1,1′-联-4,4′-二(NPD) 99.人肽酰脯氨酰异构酶(亲环蛋白)样1(PPIL1)免疫试剂盒组织蛋白酶E抗体PLEKHM3 血小板白C激酶底物同源结构域M3抗体
3-辛噻吩 98%人肽聚糖识别蛋白L(PGRP-L)免疫试剂盒紧密连接蛋白5抗体PLEKHM2/SKIP 血小板白C激酶底物同源结构域M2抗体
6,13-五并醌 99%人肽聚糖(PG)免疫试剂盒分化周期CDC42相互作用蛋白4抗体PLEKHM1 石骨症相关蛋白PLEKHM1抗体
9, 9′-螺双芴 98%人肽脯氨酰顺反异构酶(PPI)免疫试剂盒周期蛋白依赖性激酶样3抗体Plectin 网蛋白抗体
2,3,5,6-四氟⁻⁷,7,8,-四二对醌 97%人胎球蛋白A(Fetuin A)免疫试剂盒杀菌肽/天蚕抗菌肽单克隆抗体Pleckstrin/p47 血小板47蛋白抗体
1 3 5-三((3-)氨] 97%人胎盘生长因子(PLGF)免疫试剂盒第十七号染色体开放阅读框87抗体PLDL1/PLCE 脂酶C1样蛋白抗体
4,4',4''-三 98%人胎盘碱性酶(PLAP)免疫试剂盒降钙素受体抗体PLCZ1 肌脂酶PLCZ1抗体
2,2',7,7'-四溴-9,9'-螺二芴 98%人胎盘蛋白13(PP13)免疫试剂盒补体C2a链多肽抗体PLCG 2/PLC gamma 2 酯酶Cγ2抗体
线粒体提取试剂盒癌相关蛋白1抗体Human GABRA3 ELISA Kit葡萄糖琼脂
Bcl2样凋亡蛋白9抗体Human GABRB1 ELISA Kit醋酸盐琼脂
BTB/POZ结构域蛋白10抗体Human GABRD ELISA Kit亚利桑那琼脂(SA)
BTB/POZ结构域蛋白17抗体Human GABRG1 ELISA KitCHO培养基基础用于厌氧的糖生化反应(Acumedia 方法)
BTB/POZ结构域蛋白19抗体Human GABRG2 ELISA KitDL-丙氨酸甲酯盐酸盐
BXDC2蛋白抗体Human GADD34 ELISA Kit1, 5-二咖啡酰奎宁酸 1,5-Decaffeoyl quinic acid
BOLA1蛋白抗体Human GAB3 ELISA Kit葡聚糖T1000
BOLA2蛋白抗体Human GADD45A ELISA Kit人胃癌标志物ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
热门标签:线粒体提取,试剂盒













