实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:5-溴脱氧尿嘧啶核苷
英文名称:5-bromo-2-deoxyuridine (BrdU)
产品规格:100mg
发货周期:1~3天
目常用的细胞增殖标记物有4种,DNA聚合酶α(DNA polymerase α),增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),Ki-67和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)。其中Brdu为组织细胞非内源性表达存在,应用相对较广。Brdu,也称为溴化去氧尿苷,一种合成的胸苷类似物,在S期可替代胸腺嘧啶核苷选择性结合到细胞DNA中。从而检测细胞DNA合成和标记细胞分裂,凋亡等行为。在遗传研究中Brdu可通过活体注射或细胞培养加载,然后使用抗Brdu的单克隆抗体进行特异性标记,ICC或IHC法染色法显示增殖细胞。另外,还能同时结合其它细胞标记物,双重染色,来判断增殖细胞的种类,增殖速度等,对研究细胞动力学有着重要意义。
CAS:59-14-3
分子式:C9H11BrN2O5
分子量:307.10
外观:白色或类白色粉末
熔点:187~189℃
纯度(Purity, HPLC):≥99%
溶解性:溶于1M 氢氧化铵(50 mg/ml),水(高达10 mg/ml);溶于DMF,DMSO,水(加热)(50-100 mg/ml)
储存条件:-20℃,有效期2年
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
3,4-二羟 98%人胰岛素自身抗体(IAA)免疫试剂盒原癌因CD39样蛋白4抗体Rabbit Anti-chicken IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗鸡IgG
3,4-二羟 分析标准品,≥99%人胰岛素原(PI)免疫试剂盒胶原样蛋白抗体Rabbit anti-chicken IgG whole serum 兔抗鸡IgG抗血清
异香兰 97%人胰岛素样因子3(INSL3)免疫试剂盒肿瘤易感性候选因5抗体Rabbit Anti-chicken IgG 兔抗鸡IgG
3-氧 CP,98.0% 人胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)免疫试剂盒钙调蛋白激酶激酶β抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/RBITC 罗丹明标记的兔抗牛IgM
2,4-二羟酯 98%人胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP-5)免疫试剂盒中心体肌动蛋白γ1/增强型PI3K蛋白抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗牛IgM
3,4-二羟 ≥97.0% (T)人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒分裂周期相关蛋白JPO2抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗牛IgM
3,4-二羟 分析标准品, ≥97.0% (HPLC)人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒半胱蛋白酶-2抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗牛IgM
香草 98%人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)免疫试剂盒7号染色体开放阅读框63抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗牛IgM
3-氨苄 98%人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒CD2结合蛋白3抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/PE PE标记的兔抗牛IgM
对氨 98%人胰岛素样生长因子2受体(IGF-2R)免疫试剂盒胶原三股螺旋重复蛋白1抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗牛IgM
邻氨 98%人胰岛素样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框72抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold 胶体金标记的兔抗牛IgM
对 97%人胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2(IGF2BP2)免疫试剂盒2号染色体开放阅读框6抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/FITC FITC标记的兔抗牛IgM
四氢吡 97%人胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)免疫试剂盒CD318抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗牛IgM
2,5-二羟 98%人胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒着丝粒蛋白B抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗牛IgM
3,5-二羟 97%人胰岛素受体底物2(IRS-2)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框111抗体Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy5 Cy5标记的兔抗牛IgM
5-溴脱氧尿嘧啶核苷螺旋一环一螺旋蛋白5抗体Human GPR107 ELISA Kit人抗鼠抗体(HAMA)ELISA试剂盒,
二磷酸3核苷酸酶抗体Human GPR108 ELISA Kit人甘露糖凝集素受体(MBLR)ELISA试剂盒,
脑蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶29抗体Human GPR116(G-protein coupled receptor 116) ELISA Kit人高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒,
智力发育调节相关蛋白BRWD3抗体Human GPR123 ELISA Kit人套膜蛋白(iNV)ELISA试剂盒,
生物素酶抗体Human GP repeat ELISA Kit人巨噬炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒,
Bax相互作用因子1抗体Human GPAA1 ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)ELISA试剂盒,
表皮生长因子反应蛋白2抗体Human GPATCH2 ELISA Kit小鼠生长释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒,
BCL2相关X蛋白抗体Human GPBP1 ELISA Kit小鼠p53(p53)ELISA试剂盒,