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中文名称:DAPI双链DNA染料
英文名称:DAPI dihydrochloride
产品规格:10mg
发货周期:1~3天
DAPI,也称DAPI dihydrochloride,是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,和双链DNA结合后可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光。和EB(ethidium bromide)相比,对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。因为DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂,它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜,但却能穿透扰乱的细胞膜而对核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用来检测酵母线粒体DNA,叶绿体DNA,病毒DNA,microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。
DAPI染色常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。推荐工作浓度为0.5-10μg/ml。
CAS:28718-90-3
分子式:C16H17Cl2N5
分子量:350.25
纯度:>90% (from N)
注意事项
1)DAPI对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
2)荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。
3)为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
5-羧荧光素 95%颗粒抗体(ANGA)免疫试剂盒化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗豚鼠IgM
5-羧四罗丹明 95%抗体(ANA)免疫试剂盒化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗豚鼠IgM
5(6)-羧荧光素二乙酯 for fluorescence, ≥90.0% (HPLC)防御素3(DEFA3)免疫试剂盒化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗豚鼠IgM
6-羧荧光素二乙酯 95%防御素1-3(HNP1-3)免疫试剂盒化β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗豚鼠IgM
5-羧荧光素琥珀酰亚酯 90%人中心体纺锤体相关蛋白1(CSPP1)免疫试剂盒βA3/A1-crystallin蛋白抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/PE PE标记的兔抗豚鼠IgM
5(6)-羧荧光素 95%人中心体蛋白350kDa(CEP350)免疫试剂盒γS-crystallin蛋白抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗豚鼠IgM
5(6)-羧荧光素琥珀酰亚酯 96%人中华肝吸虫(CS)抗体(IgG)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框85抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Gold 胶体金标记的兔抗豚鼠IgM
6-羧荧光素琥珀酰亚酯 90%人制瘤素M受体(OSMR)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框87抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/FITC FITC标记的兔抗豚鼠IgM
5- 羧荧光素二乙酯 95%人酯酰甘油激酶ζ(DGKZ)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框95抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗豚鼠IgM
异硫荧光素(异构体I) 90%人脂氧素A4(LXA4)免疫试剂盒补体C1S链多肽抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗豚鼠IgM
异硫荧光素 96%人脂联素受体2(ADIPOR2)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框106抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy5 Cy5标记的兔抗豚鼠IgM
二乙荧光素 97%人脂联素受体1(ADIPOR1)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框107抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Cy3 Cy3标记的兔抗豚鼠IgM
3- 99%人脂联素(ADP)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框117抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/Bio 生物素标记的兔抗豚鼠IgM
3- 98%人脂肪转运蛋白5(FATP5)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框118抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/APC APC标记的兔抗豚鼠IgM
4- 98%人脂肪结合蛋白4(FABP-4)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框144抗体Rabbit Anti-Guinea pig IgM/AP 碱性酶(AP)标记的兔抗豚鼠IgM
DAPI双链DNA染料BMP内皮调节蛋白抗体Human HAL ELISA KitT1N1 琼脂 用于的培养(SN标准)
肝病NS5A反转录蛋白8抗体Human HAPLN4 ELISA Kit重组人甲状旁腺1-84
骨形态发生蛋白1/胶原C蛋白肽链内切酶抗体Human hamartin ELISA KitCBZ-D-谷氨酸
骨形态发生蛋白9抗体Human HAO1 ELISA Kit人组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒,TPA ELISA kit
微管蛋白β辅助因子D抗体Human HAP1 ELISA Kit人钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒,CR ELISA
钙粘蛋白相关蛋白受体BTR1抗体Human Harmonin ELISA Kit人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA试剂盒,N-MID-OT ELISA
有丝分裂蛋白BUB3抗体Human HARS2 ELISA Kit人血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒,
p60TRP蛋白抗体Human HAT1 ELISA Kit人C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。