实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:罗丹明123
英文名称:Rhodamine 123
产品规格:5mg
发货周期:1~3天
Rhodamine 123 (罗丹明123, Rh 123)是一种常用的阳离子绿色荧光染料,可以透过细胞膜从而在活细胞线粒体内聚集,并发出黄绿色荧光。广泛用作检测线粒体膜电位的荧光探针,并且对细胞没有任何毒性。
CAS:62669⁻⁷0-9
分子式:C21H17ClN2O3
分子量:380.82
纯度:≥98%(HPLC)
使用方法
1. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为 5×104~5×105个/mL。
2. 孵育该载玻片,用 PBS或Hank’s 液洗涤细胞。
3. 用培养基稀释 Rh123母液以制备 1~20μM Rh123缓冲液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。
4. 将 Rh123缓冲液加入载玻片并在37℃下孵育 30 分钟至 1 小时。
5. 去除 Rh123 缓冲液并用培养基洗涤细胞(洗涤细胞后为了固定,加入 10%福尔马林缓冲液并孵育 15~20 分钟,接着用 PBS洗涤)。
6. 用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞。
储存条件:-20℃避光,有效期一年
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
三化铑,水合 Rh 38.5-42.5% 人转化生长因子β受体2(TGF-βR2)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框139抗体Rabbit Anti-horse IgM/APC APC标记的兔抗马IgM
铑 99.9%人转化生长因子β受体1(TGFBR1)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框140抗体Rabbit Anti-horse IgM/AP 碱性酶(AP)标记的兔抗马IgM
铑黑 99.9% metals basis人转化生长因子β激蛋白22(TSC22)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框142抗体Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗马IgM
铑碳催化剂 铑含量 (wt%) ,5%人转化生长因子β3(TGF-β3)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框163抗体Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗马IgM
氧化钌 99.9% metals basis人转化生长因子β2(TGFβ2)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框169抗体Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗马IgM
氧化钌(IV) 水合物 钌含量75%人转化生长因子β1(TGF-β1)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框173抗体Rabbit Anti-horse IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗马IgM
氧化铑,无水 99.8% metals basis,Rh 81%人转化生长因子α(TGF-α)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框21抗体Rabbit Anti-horse IgM 兔抗马IgM
辛铑(II)二聚体 铑含量:26.5% 人转谷氨酰酶2C多肽(TGM2)免疫试剂盒化丝氨/苏氨蛋白激酶II β/casein kinase IIβ抗体Rabbit Anti-horse IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗马IgG
氧化铑,水合 铑 55%人主要组织相容性复合体,II类,DQα2(HLA-DQA2)免疫试剂盒癌胚抗原抗体Rabbit Anti-horse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗马IgG
四钯钠 98%人周期素依赖性激酶5(CDK5)免疫试剂盒癌胚抗原抗体Rabbit Anti-horse IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗马IgG
碳银 CP,98.0%人周期素依赖性激酶4(CDK-4)免疫试剂盒粘附分子相关蛋白/癌因下调蛋白抗体Rabbit Anti-horse IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗马IgG
金钠 金含量,48% 人肿瘤相关抗原(TAA)免疫试剂盒淋巴抗原Ly6c抗体Rabbit Anti-horse IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗马IgG
银 银含量, 77.0 % 人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TSGF)免疫试剂盒周期素E抗体Rabbit Anti-horse IgG/PE PE标记的兔抗马IgG
四(三膦)钯(0) 99.8% metals basis, Pd 9.0%人肿瘤坏死因子诱导因6蛋白(TNFAIP6)免疫试剂盒7号染色体开放阅读框50抗体Rabbit Anti-horse IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG
间 CP,98%人肿瘤坏死因子相关激活诱导因子(TRANCE)免疫试剂盒7号染色体开放阅读框53抗体Rabbit Anti-horse IgG/Gold 胶体金标记的兔抗马IgG
罗丹明123溴脱氧尿苷抗体Human GYS1 ELISA Kit大鼠凝血酶受体(TR)ELISA试剂盒,
B迁移基因2抗体Human H2AFY2 ELISA Kit大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒,
骨形态发生蛋白2抗体Human H3F3B ELISA Kit大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒,
骨形态发生蛋白7抗体Human HABP2 ELISA Kit大鼠凋亡相关因子配体(FASL) ELISA试剂盒,
β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Human HACL1 ELISA Kit大鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒,
β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体Human HBQ1 ELISA Kit猪肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒,
癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗体Human HBS1L ELISA Kit鸡核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒,
血型抗原体蛋白抗体Human HBZ ELISA Kit兔子组织因子(TF)ELISA试剂盒,