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中文名称:喜树碱溶液(5mM)
英文名称:Camptothecin (5mM)
产品规格:400μl
发货周期:1~3天
喜树碱(Camptothecin,CPT),从Camptotheca acuminata(Camptotheca,喜树)的树皮和树干中分离到的一种类生物碱,呈现出抗白血病和肿瘤特性。喜树碱是一种有效的拓扑异构酶I(Topoisomerase I, Topo I)抑制剂,不可逆结合DNA-Topo I复合物,抑制Topo I切割后DNA的重新结合,并且以共价连接DNA的方式固定化酶。该酶复合物随后发生泛素化并被26S蛋白酶体破坏,终将胞内拓扑异构酶消耗殆尽。低浓度的喜树碱可停滞细胞周期在S期,并以细胞周期依赖或者非依赖的方式诱导大量正常或癌变细胞发生凋亡。
喜树碱常被用来诱导并建立细胞凋亡模型,其在体外按照剂量依赖的表现诱导凋亡发生。本品以溶于DMSO的母液形式提供,浓度为5mM,只需加入细胞培养液稀释到需要的工作浓度即可,操作简单方便。
英文别名:(+)-camptothecin;(S)-camptothecin;21,22-Secocamptothecin-21-oic acid; lactone 20(S)-camptothecin; (S)-(+)-camptothecin; NSC100880;
CAS:7689-03-4
分子式:C20H16N2O4
分子量:348.36
纯度:>98 %
储存条件:-20℃,有效期一年
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
5-氟-2- 98%兔溶菌酶(LZM)免疫试剂盒猫眼综合征染色体候选因6抗体Rabbit anti-mouse IgG-Fc fragment whole serum 兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清
4-氟-2- 97%兔热休克蛋白70(HSP⁻⁷0)免疫试剂盒21号染色体开放阅读框2抗体Rabbit Anti-mouse IgG-Fc 兔抗小鼠IgG-Fc
4-氟-3- 99%兔热休克蛋白40(HSP-40)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框86抗体Rabbit Anti-mouse IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗小鼠IgG
2-酰 98%兔去肾上腺素(NA)免疫试剂盒21号染色体开放阅读框128抗体Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗小鼠IgG
3-酰 97%兔列腺素F(PG-F)免疫试剂盒6号染色体开放阅读框62抗体Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠IgG
2-氟 98%兔葡萄糖-6--1-脱氢酶(G6PD)免疫试剂盒CCZ1蛋白抗体Rabbit Anti-mouse IgG/PE-CY5 PE-CY5标记的兔抗小鼠IgG
3-氟 97%兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)免疫试剂盒脑蛋白5抗体Rabbit Anti-mouse IgG/PE-Cy3 PE-Cy3标记的兔抗小鼠IgG
2-氟联-4- 97%兔凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)免疫试剂盒21号染色体开放阅读框58抗体Rabbit Anti-mouse IgG/PE PE标记的兔抗小鼠IgG
3-氟-4- 98%兔凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX1)免疫试剂盒20号染色体开放阅读框43抗体Rabbit Anti-mouse IgG/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠IgG
3-氟-5-三氟 97%兔尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR/uPAR)免疫试剂盒9号染色体开放阅读框43抗体Rabbit Anti-mouse IgG/Gold 胶体金标记的兔抗小鼠IgG
2-氟-3-氧 97%兔尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)免疫试剂盒几丁质酶3样蛋白3抗体Rabbit Anti-mouse IgG/FITC FITC标记的兔抗小鼠IgG
2-氟-4- 96%兔内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)免疫试剂盒趋化素样因子超家族成员2抗体Rabbit Anti-mouse IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗小鼠IgG
2-氟-5-三氟 98%兔末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)免疫试剂盒趋化素样因子超家族成员2亚型1抗体Rabbit Anti-mouse IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的兔抗小鼠IgG
2-氟-6-氧 98%兔淋巴功能相关抗原3(LFA-3/CD58)免疫试剂盒18号染色体开放阅读框1抗体Rabbit Anti-mouse IgG/Cy3 Cy3标记的兔抗小鼠IgG
3-氟-4- 97%兔粒集落激因子(G-CSF)免疫试剂盒色素c氧化酶VIIA亚型2抗体Rabbit Anti-mouse IgG/Bio 生物素标记的兔抗小鼠IgG
喜树碱溶液(5mM)肝素结合蛋白/阳离子抗蛋白37/天青素抗体Human HPCAL4 ELISA Kit人八聚体转录因子(OTF2A)ELISA试剂盒,
核突触蛋白抗体Human HPDL ELISA Kit人吡啶酚(PYD)ELISA试剂盒,
β-肌动蛋白/β-Actin 抗体(内参抗体)Human HPD ELISA Kit人12羟二十烷四烯酸(12-HETE)ELISA试剂盒,
β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体Human HPGD ELISA Kit人抗巨病抗体IgM(anti-CMV IgM)ELISA试剂盒,
β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体Human HPS1 ELISA Kit人抗抗体(AsAb)ELISA试剂盒,
β淀粉样肽1-28/β-Amyloid 1-28抗体Human HPGDS ELISA Kit人补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒,
激活素受体2A抗体Human HPS3 ELISA Kit人补体片断5b(C5b)ELISA试剂盒,
水通道蛋白5抗体Human HPS4 ELISA Kit人生长相关蛋白43(GAP-43)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。