中文名称:细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒(Calcein AM,PI法,适用于FACS、FM)
英文名称:Live & Dead Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Cells 说
产品规格:1000T
发货周期:1~3天
本试剂盒为动物细胞死活检测提供了双色荧光染色方法。本试剂盒采用两种广泛常用的荧光探针,通过检测细胞内酯酶活性和质膜完整性两个方面反映细胞活力。本试剂盒适用于荧光显微镜、荧光多孔板、扫描仪、流式细胞仪以及其他荧光检测系统。本试剂盒可以应用于大多数的真核哺乳动物细胞,包括贴壁细胞核某些组织,但不适用与细菌、酵母。该方法更快捷安全且灵敏度更高。
原理:在钙黄素AM 存在活细胞内时,其特点就是由于胞内无所不在的酯酶活性作用,由几乎无荧光、具有细胞膜透性的钙黄素AM生成具有强烈荧光信号的绿色荧光物质(Ex/Em:495nm/520nm)。而对于受损的细胞膜来说,碘化丙啶(PI)可以传过进入细胞,与核酸结合,荧光信号从而放大40 倍,产生一个明亮的红色荧光信号的死细胞(Ex/Em:530nm/620nm)。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
2- 98%豚鼠雌激素(estrogen)免疫试剂盒钙调素调节蛋白相关蛋白抗体RHCG RH血型C糖蛋白抗体
2-硫-5-嘧啶-4- 95%豚鼠肠脂肪结合蛋白(iFABP)免疫试剂盒紧密连接蛋白1抗体RHCE Rh血型C抗原抗体
2--4-硝吡啶 98%豚鼠表皮生长因子(EGF)免疫试剂盒1号染色体开放阅读框149抗体RHBDD3 垂体瘤凋亡抗体
4-吲哚 98%豚鼠白三烯D4(LTD4)免疫试剂盒化原癌因c-kit抗体RGS5 G蛋白信号转导调节因子5抗体
2--6-氟 98%豚鼠白三烯B4(LTB4)免疫试剂盒化原癌因c-kit抗体RGS4 精神分裂症相关蛋白9抗体
2--N,N-二乙酰 97%豚鼠白介素8(IL-8)免疫试剂盒化淋巴衍生C-型凝集素抗体RGS2 G蛋白信号转导调节因子2抗体
4--2-三氟喹啉 97%豚鼠白介素6(IL-6)免疫试剂盒2号染色体开放阅读框39抗体RGS19 G蛋白信号转导调节因子19抗体
2--4-吡啶 95%豚鼠白介素5(IL-5)免疫试剂盒2号染色体开放阅读框49抗体RGC32 补体应答因32抗体
2,6-二氟-4-羟 98%豚鼠白介素4(IL-4)免疫试剂盒2号染色体开放阅读框50抗体RGAG4 RGAG4蛋白抗体
2,4-二 98%豚鼠白介素22(IL-22)免疫试剂盒科凯恩氏综合症相关蛋白/早衰蛋白CSA抗体RFTN2 RFTN2蛋白抗体
L-苹果二酯 98%豚鼠白介素2(IL-2)免疫试剂盒化角蛋白8抗体RFPL4B/RNF211 环指蛋白211抗体
2,2-二丁 98%豚鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)免疫试剂盒化角蛋白8抗体RFPL4A/RNF210 环指蛋白210抗体
3,3-二烯 98%豚鼠白介素1β(IL1B)免疫试剂盒化角蛋白18抗体RFPL2/RFPL3 RET指蛋白样2/3抗体
2,5-二 98%豚鼠白介素18(IL-18)免疫试剂盒胞粘蛋白2抗体Rffl/RING finger protein 189 环指蛋白189抗体
3,5-二-4-吡唑 97%豚鼠白介素17(IL-17)免疫试剂盒色素CPA6抗体RFESD RFESD蛋白抗体
细胞活力(活死细胞染色)检测试剂盒(Calcein AM,PI法,适用于FACS、FM)ADP核糖基化因子5抗体Human JMJD4 ELISA Kit人吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒,PY ELISA
ADP核糖基化因子结合蛋白抗体Human JIP3 ELISA Kit人腺苷酸环化酶1(AC-1)ELISA试剂盒,
ADP核糖基化因子GTP酶激活蛋白1抗体Human ITPK1 ELISA Kit人基质金属蛋白酶8/中性粒胶原酶(MMP-8)ELISA试剂盒,
ADP核糖基化因子相关蛋白1Human IP6K1(Inositol hexakisphosphate kinase 1) ELISA Kit人催产素(OT)ELISA试剂盒,
琥珀酸裂解酶抗体Human IP6K2 ELISA Kit小鼠糖蛋白130(gp130)ELISA试剂盒,
精氨酰tRNA合成酶抗体Human Integrin alpha-3 ELISA Kit人补体片断3b(C3b)ELISA试剂盒,
真核翻译起始因子2C3抗体Human INSIG2 ELISA Kit人纤溶抑制因子/凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)ELISA试剂盒,
真核翻译起始因子2C4抗体Human IPO11 ELISA Kit人钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒,