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中文名称:Ki67细胞增殖检测试剂盒(IHC法)
英文名称:Ki-67 cell proliferation Detection Kit(IHC)
产品规格:50T
发货周期:1~3天
Ki-67 蛋白是细胞周期相关的一种核蛋白,主要表达于细胞增殖分裂的各个时期(G1、S、G2 和M 期),但是在静息的细胞(G0 期)中不表达。
Ki-67 常用于检测肿瘤细胞的生长指数(免疫组化法利用计算细胞总数中的Ki-67 阳性细胞数所占比例得到Ki-67 指数)。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
异铝 ≥98%小鼠Apelin 免疫试剂盒脑肌激酶BCK抗体RNF56/CBLB 环指蛋白56
异铝 99.99% metals basis小鼠Apelin 13(AP13)免疫试剂盒β葡萄糖苷酶抗体RNF44 环指蛋白44抗体
氢氧化铝 99.99%,2~10μm小鼠8异列腺素F2α(8-iso-PGF2a)免疫试剂盒癌相关蛋白1抗体RNF43 环指蛋白43抗体
氢氧化铝 99.99%,0.05~1.5μm小鼠8异列腺素(8-iso-PG)免疫试剂盒Bcl2样凋亡蛋白9抗体RNF41 环指蛋白41抗体
纳米氧化镁 50nm,球形,99.9% metals basis小鼠8羟脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫试剂盒BTB/POZ结构域蛋白10抗体RNF40 环指蛋白40抗体
二氧化锆 99.99% metals basis,D50:0.2~0.4μm小鼠6酮列腺素F1a(6-keto-PGF1a)免疫试剂盒BTB/POZ结构域蛋白17抗体RNF36 环指蛋白36抗体
纳米氧化锌 99.9% metals basis,30±10nm小鼠6酮列腺素(6-K-PG)免疫试剂盒BTB/POZ结构域蛋白19抗体RNF35 环指蛋白35抗体
5-氨清 98%小鼠5羟色受体2A(5-HTR 2A)免疫试剂盒BXDC2蛋白抗体RNF34 环指蛋白34抗体
1,3-二-5-吡唑酮 96%小鼠5羟色(5-HT)免疫试剂盒BOLA1蛋白抗体RNF32 环指蛋白32抗体
0.99小鼠5羟吲哚乙(5-HIAA)免疫试剂盒BOLA2蛋白抗体RNF31/HOIP 环指蛋白31抗体
分析标准品小鼠5羟二十碳四烯(5-HETE)免疫试剂盒杀菌通透性增加蛋白样1抗体RNF25 环指蛋白25抗体
0.92小鼠5核苷酶(5-NT)免疫试剂盒杀菌/通透性增加蛋白样2抗体RNF24 环指蛋白24抗体
盐金刚烷 99%小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)免疫试剂盒嗜脂蛋白样3抗体RNF23 环指蛋白23抗体
盐金刚烷 99%小鼠4-羟壬烯(HNE)免疫试剂盒杀菌/通透性增加蛋白样3抗体RNF215 环指蛋白215抗体
D-氨酯盐盐 98%小鼠Ⅲ型胶原肽(PⅢP)免疫试剂盒BRD1蛋白抗体RNF213 环指蛋白213
Ki67细胞增殖检测试剂盒(IHC法)血管生成素样蛋白4抗体Human KCNIP1 ELISA Kit鸭白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒,
整合素样金属蛋白酶与凝血酶10型抗体Human KCTD14 ELISA Kit猴B病(BV)ELISA试剂盒,
嘌呤嘧啶核酸内切酶2抗体Human KCNIP3 ELISA Kit山羊P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒,
神经丝蛋白抗体Human KCNJ5 ELISA Kit兔子血栓调节蛋白(TM)ELISA试剂盒,
β淀粉样肽(1-28)抗体Human KCNAB1 ELISA Kit蛇因子(CVF) ELISA试剂盒,
有丝分裂激酶B抗体Human KCNAB2 ELISA Kit肾素(Renin)ELISA试剂盒--动物,人
软骨蛋白聚糖抗体Human KCNC4 ELISA Kit多价蛋白胨-酵母膏 (PY) 培养基 用于产气荚膜梭的培养(SN标准)
去整合素样金属蛋白酶10抗体Human KCNB1 ELISA Kit葡聚糖凝胶QAE-A50
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。