实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:细胞活力快速检测试剂盒(Luminescent)
英文名称:
产品规格:500T
发货周期:1~3天
本试剂盒是通过对ATP 进行定量测定来检测培养物中活细胞数目的一种均质检测方法。ATP 是活细胞新陈代谢的一个指标。细胞活力快速检测试剂盒为多孔板而设计,是进行自动化高通量筛选(HTS)、细胞增殖和毒性分析的理想选择。均质检测步骤就是将单一试剂直接加入含有血清的培养细胞中,无需洗涤细胞、去除培养基或进行多步加样操作。在384 孔板上,加入试剂并混合后,10 分钟内,该系统可检测到的每个孔内的细胞数低为15 个。
均质检测的" 加样-混合-检测" 的操作方案使得细胞裂解和产生的发光信号与存在ATP 量成正比,而ATP 量直接与培养物中的细胞数量成正比。细胞活力快速检测试剂盒产生一种"辉光型" 的发光信号,半衰期一般大于5 小时,因细胞类型和培养基而异。由于信号半衰期长,不需要使用试剂自动进样器,就可灵活地进行连续的或批量的多孔板处理。独特的均质检测方案避免了那些需要多个步骤的ATP 检测方法可能会引入的误差。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
亚铁化钠 CP小鼠DNA(胞嘧啶-5)转移酶1(DNMT1)免疫试剂盒转录调节蛋白BACH2抗体RPLP0 性核糖体蛋白大亚P0抗体
原酯 98%小鼠DAB2互作蛋白(DAB2IP)免疫试剂盒杆菌致死因子LF抗体RPL5 核糖体蛋白L5抗体
原三乙酯 99%小鼠C型钠尿肽(CNP)免疫试剂盒蛋白BOC抗体RPL19 核糖体蛋白L19抗体
氟化铵 AR,98%小鼠C肽(C-Peptide)免疫试剂盒氨肽酶A抗体RPL15 核糖体蛋白L15抗体
氟化铵 GR,98%小鼠C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒脑钠素/利钠肽抗体RPL11/GIG34 生长抑制蛋白34
氟化氢铵 AR,98.5% 小鼠CXC趋化因子受体4(CXCR4)免疫试剂盒Bcl2 beta蛋白抗体RPH3AL Ras相关GTP结合蛋白抗体
氢氟 AR,40.0%小鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)免疫试剂盒骨涎蛋白抗体RPA70 单链结合蛋白70抗体
氟 AR,40.0%小鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)免疫试剂盒死亡调解子抗体RPA32/RPA2 复制因子A蛋白2
氟 CP,40.0%小鼠CXC趋化因子配体1(CXCL1)免疫试剂盒Apollon凋亡抑制蛋白抗体RP1/DCDC4A 视网膜色素变性蛋白1抗体
氟 49.5-50.5%溶液小鼠CXC趋化因子13(Cxcl13/Blc/Scyb13)免疫试剂盒表面趋化因子受体6抗体ROS/c ros 活性氧簇ROS抗体
氨胍碳氢盐 98.5%小鼠Cramp 免疫试剂盒β-内啡肽/β endorphin抗体RORG/ROR gamma 维相关孤儿受体γ抗体
三氧化二锑 99.99% metals basis小鼠c-jun 免疫试剂盒骨成型蛋白受体1A抗体RORB 维相关孤儿受体β抗体
三氧化二锑 AR,99.5%小鼠c-fos 免疫试剂盒Bcl-xL蛋白抗体ROR1/ROR alpha 维相关孤儿受体α抗体
重去肾上腺素 ≥98%(HPLC),USP小鼠CD8分子(CD8)免疫试剂盒化Bcl-xL(Ser62)抗体ROR Gamma/RORC/NR1F3 孤儿核受体抗体
L-去肾上腺素 98%小鼠CD4分子(CD4)免疫试剂盒相关死亡促进因子Bad抗体Ron 原癌因c-Met相关酪氨激酶抗体
细胞活力快速检测试剂盒(Luminescent)腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体Human EFCAB14(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 14) ELISA Kit人基质裂解素(ST3)ELISA试剂盒,
去整合素样金属蛋白酶19抗体Human KDM2A ELISA Kit人抗风疹病IgG抗体(anti-RV IgG)ELISA试剂盒,
原癌基因AF4蛋白抗体Human KCNJ5 ELISA Kit小鼠γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒,
整合素样金属蛋白酶与凝血酶样1蛋白抗体Human KCNJ15 ELISA Kit人总蛋白S(TPS)ELISA试剂盒,
整合素样金属蛋白酶与凝血酶样2蛋白抗体Human KCNJ3 ELISA Kit人载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒,
整合素样金属蛋白酶与凝血酶样3蛋白抗体Human KCNJ1 ELISA Kit人网膜素(omentin)ELISA试剂盒,
去整合素样金属蛋白酶20抗体Human KCNK18 ELISA Kit人抑制酸性蛋白(IAP)ELISA试剂盒,
去整合素样金属蛋白酶23抗体Human KCNN3 ELISA Kit小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒,