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中文名称:kFluor647-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)
英文名称:
产品规格:20T|10T|50T
发货周期:1~3天
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。精确的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测试剂盒是brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,可以在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击”反应,一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。
本试剂盒中,EdU试剂含有炔烃,而kFlour647染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效,易于使用。只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。标准化的固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞,而brdu方法则需要DNA变性(如酸变性、热变性或者用Dnase消化)去暴露BrdU,从而方便BrdU抗体结合。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
2,4-二硝标准溶液 1000μg/ml,溶剂:小鼠α1微球蛋白(α1-MG)免疫试剂盒癌相关因2抗体(锌指蛋白364)SAMD15/C14orf174 14号染色体开放阅读框174
2,5-二硝标准溶液1.00mg/ml,溶剂:小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)免疫试剂盒B淋巴酪氨激酶抗体SAMD14 SAMD14抗体
2,4-二硝 GR,98%小鼠α1抗胰糜蛋白酶(AACT)免疫试剂盒脑特异性血管生成抑制蛋白2抗体Salusin alpha 心血管调节肽Salusin-α抗体
2,4-二硝 分析标准品,用于环境分析小鼠α1干扰素(IFN-α1)免疫试剂盒促凋亡BNIP3L蛋白抗体Salmonella typhimurium O 氏菌体蛋白O抗原抗体
2,4-二硝 99%小鼠Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫试剂盒Bcl2抑凋亡蛋白Bag3抗体Salmonella typhimurium 菌
硝胍 CP,98%小鼠Wnt-10b蛋白(WNT10B)免疫试剂盒BCL2样10促凋亡蛋白抗体Salmonella tropina 沙门氏菌菌体蛋白抗体
硝胍 >99.0%(GC)小鼠V-Ha-Ras肉瘤病癌因同源物(HRAS)免疫试剂盒BCL2样12含脯氨蛋白抗体Salmonella paratyphi a 型副氏菌抗体
反式-1,3-二烯 97%小鼠T活化连接蛋白(LAT)免疫试剂盒BCL2分子伴侣调节蛋白5抗体Salmonella enteritidis/SE 氏菌抗体
羟乙叉二膦 60%水溶液小鼠T表面糖蛋白CD3 epsilon链(CD3E/T3E)免疫试剂盒转录因子BTF3抗体Salmonella enteritidis H 氏菌鞭毛抗原H抗体
聚烯 平均分子量M.W ~3,000 小鼠T白血病同源盒蛋白1(Tlx1/Hox11/Tlx-1)免疫试剂盒Bcl2相互作用蛋白2抗体Salmonella 沙门氏菌抗体(多型)
聚烯钠 50% 水溶液小鼠Toll样受体7(TLR7)免疫试剂盒癌扩增序列蛋白4抗体SAHH S腺苷L-同型半胱氨水解酶
异丁酐 98%小鼠Toll样受体5(TLR-5)免疫试剂盒化T淋巴受体抗体SAA4/Serum amyloid A 4 protein 血清淀粉样蛋白4抗体
四邻二酐 98%小鼠TGF-β诱导早期因1(TIEG1)免疫试剂盒碱性核蛋白1/锌指蛋白basonuclin抗体SA2 粘结蛋白SA2抗体
乙酰溴 97%小鼠Tau蛋白免疫试剂盒癌膜蛋白11抗体(梯度同源蛋白2)SA1/Nuclear protein stromal antigen 1 粘结蛋白SA1抗体
溴代炔 99%小鼠Smad7 免疫试剂盒人脑钠素单克隆抗体S100PBP/S100P binding protein S100P结合蛋白抗体
kFluor647-EdU法细胞增殖检测试剂盒(流式)促肾上腺皮质(1-39)抗体Human KIF3A ELISA Kit人肾小球组织糖基化终末产物(GTE-AGE)ELISA试剂盒,
促肾上腺皮质ACTH(18-39)抗体Human KIAA0125 ELISA Kit人可溶性肌球蛋白重链1(sMHC-1)ELISA试剂盒,
促肾上腺皮质ACTH (7-23)抗体Human KIAA0087 ELISA Kit人血小板相关球蛋白(PAIg)ELISA试剂盒,
活性依赖的神经保护肽抗体Human KIAA0141 ELISA Kit小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒,
α1酸性糖蛋白1/类粘蛋白1抗体Human KIAA0182 ELISA Kit小鼠β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒,
α1酸性糖蛋白2抗体(类粘蛋白2)Human KCTD5 ELISA Kit小鼠主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHCⅠ/H-2Ⅰ)ELISA试剂盒,
磷酸化水通道蛋白2抗体Human KIAA0430 ELISA Kit小鼠骨成型蛋白7(BMP⁻⁷)ELISA试剂盒,
酪氨酸转氨酶抗体Human KDM2A ELISA Kit大鼠表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。