实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)
英文名称:
产品规格:20T|200T
发货周期:1~3天
TUNEL 检测同时需要设阳性和阴性对照,以显示试验的客观性及准确性。可使用本试剂盒制备阳性片(使用客户自备样本),其后续步骤与待测样本同样进行。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
二 ACS, 98.5% (isomers plus ethylbenzene)小鼠γ氨丁(GABA)免疫试剂盒β1,3半糖转移酶3抗体SCHAD/HADHSC 短链L-3羟烷辅酶A脱氢酶抗体
ACS, 98.5+% (isomers plus ethylbenzene)小鼠β血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)免疫试剂盒红阴离子交换蛋白1抗体SCGB3A1 结合珠蛋白家族3A1抗体
氧化铟 SP小鼠β素(BTC)免疫试剂盒脑特定蛋白Brn3B抗体SCG3/SgIII 分泌粒蛋白3抗体
氧化铟 99.99% metals basis, <100 nm (TEM)小鼠β位淀粉样体蛋白裂解酶1(BACE1)免疫试剂盒Bcl-2同源结构域蛋白抗体SCF 干生长因子抗体
纳米二氧化锡 99.9% metals basis,50⁻⁷0nm小鼠β葡萄糖苷酶(βGD)免疫试剂盒骨形态发生蛋白4抗体SCEL SCEL蛋白抗体
4,4'-二氨二砜 97%小鼠β萘酚(β-naphthol)免疫试剂盒脑和急性白血病胞浆蛋白抗体SCDGFB/PDGF-D 血小板源性生长因子D(脊髓源性生长因子B)
4,4'-二氨二砜 分析标准品小鼠β内酰酶抑制剂(BLI)免疫试剂盒骨髓质干抗原2抗体SCD1 固酰辅酶A脱氢酶1抗体
2-萘磺 98%小鼠β内啡肽受体(β-EPR)免疫试剂盒组蛋白相关Bmi1抗体SCCA/SERPINB4 丝氨蛋白酶抑制剂B4抗体(鳞状癌抗原)
3-吡啶磺 98%小鼠β内啡肽(β-EP)免疫试剂盒癌转移抑制因1抗体SCC112/PIG54 增殖诱导蛋白54抗体
1-萘磺钠 technical grade, 85%小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)免疫试剂盒大脑富含鸟苷激酶相关蛋白抗体Scavenger Receptor BII 清道夫受体B2抗体
2,3-二-1,4-萘醌 98%小鼠β甘露糖苷酶(β Manase)免疫试剂盒脑富含膜附着信号蛋白1抗体SCAP/SREBF chaperone protein 固调节元件结合蛋白裂解激活蛋白抗体
1-代萘 98%小鼠β干扰素(IFN-β/IFNB)免疫试剂盒卵黄状黄斑病蛋白3抗体Sca1/Ly6A/E T淋巴激活蛋白抗体
1-硝萘 CP,94%小鼠β-防御素3 免疫试剂盒卵黄状黄斑病蛋白抗体SBP1/Selenium Binding Protein 1 硒结合蛋白1抗体
1-硝萘 99%小鼠β-防御素1 免疫试剂盒卵黄状黄斑病蛋白4抗体SATB1 核质结合区结合蛋白1抗体
β-萘酚 AR小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)免疫试剂盒杆菌菌体蛋白抗体SASS6 纺锤体组装异常蛋白6抗体
TUNEL检测阳性对照制备试剂盒(可配套TUNEL系列试剂盒使用)精氨酸加压素受体2抗体Human KLF17 ELISA Kit大鼠Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试剂盒,
骨架肌动蛋白样蛋白3抗体Human KIF1C ELISA Kit大鼠c-jun ELISA试剂盒,
膜粘连蛋白8抗体Human KIF22 ELISA Kit大鼠抑制素结合蛋白(INHBP)ELISA试剂盒,
水通道蛋白8抗体Human KIF20A ELISA Kit大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA试剂盒,
锚蛋白重复结构域蛋白40抗体Human KIF1B ELISA Kit大鼠水通道蛋白2(AQP-2) ELISA试剂盒,
凋亡抑制因子5抗体Human KIF26B ELISA Kit大鼠载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒,
水通道蛋白-3抗体Human KIF2A ELISA Kit猪可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒,
载脂蛋白D抗体Human KIF1B ELISA Kit猪去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒,