中文名称:APC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)
英文名称:BrdU cell proliferation Detection Kit
产品规格:20T
发货周期:1~3天
本试剂盒细胞增殖检测是一个基于荧光检测的实验,可以监测细胞健康和通过胸苷掺合来估量DNA 合成从而监测细胞分裂。
溴脱氧尿苷(5-溴代-2'-脱氧尿苷, BrdU) 是一种合成的核苷酸即胸苷的类似物。BrdU 通常被用于检测活组织中再生的细胞。
BrdU 可以掺合到复制细胞中新的合成DNA 中(在细胞周期S 期),在DNA 复制可代替胸苷。利用抗BrdU 的特异性抗体便可以用于检测这个插入的化学品,从而检测出细胞是否在复制其DNA。
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实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
烯丁酯 CP,98%小鼠白介素21(IL-21)免疫试剂盒Bcl-2结合抑凋亡蛋白2抗体SDHC 琥珀色素亚B560抗体
乙烯 CP,含10-15ppm 4-叔-丁邻二酚稳定剂小鼠白介素2(IL-2)免疫试剂盒β淀粉样肽1-42抗体SDHB 铬瘤患者抑癌因SDHB抗体
乙烯 99%,含10-15ppm 4-叔-丁邻二酚稳定剂小鼠白介素1受体相关激酶1(IRAK1)免疫试剂盒化内收蛋白抗体SDHA 琥珀脱氢酶复合体亚A抗体
乙乙烯酯 CP,98%小鼠白介素1受体拮抗剂(IL1Ra/CD121)免疫试剂盒程序性死亡配体1抗体SDH/Sorbitol Dehydrogenase 山梨脱氢酶抗体
二硫化钼 AR,99%小鼠白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)免疫试剂盒程序性死亡配体1抗体SDH/S6PDH 6-山梨脱氢酶抗体
二硫化钨 99.9%小鼠白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)免疫试剂盒β淀粉样肽(1-42)抗体SDF4 质衍生因子4抗体(钙结合蛋白)
生物冰袋,500g/袋,190*120*20mm小鼠白介素1β体(pro-IL1B)免疫试剂盒β淀粉样肽(1-42)单克隆抗体SDF-1/CXCL12 质衍生因子-1抗体
特丁硫 分析标准品(剧品)小鼠白介素1β(IL-1β)免疫试剂盒胆汁盐输出泵/ATP结合盒转运蛋白11抗体SDF-1/CXCL12 质衍生因子1抗体
二硫化钼 AR,99%小鼠白介素1α(IL-1α)免疫试剂盒BSPRY蛋白抗体SDCG1 血清学定义结肠癌抗原1抗体
化钼 99.6%小鼠白介素18结合蛋白(IL-18BP)免疫试剂盒BAIAP2L2蛋白抗体SDCCAG8 结肠癌抗原8抗体
化钨 99.9%小鼠白介素18(IL-18)免疫试剂盒化相关死亡促进因子抗体SDCCAG10 结肠癌抗原10抗体
二硫化钨 99.9%小鼠白介素17(IL-17)免疫试剂盒化相关死亡促进因子抗体SCYLV 甘蔗SCYLV抗体
二硫化钨 99.99%,6µm小鼠白介素16(IL-16)免疫试剂盒人β亚人绒毛膜促性腺激素(β HCG)抗体SCYL1BP1 SCYL结合蛋白1抗体
碳化钨 9.8%,3-20nm 小鼠白介素15(IL-15)免疫试剂盒钙激活通道蛋白 α 1抗体SCUBE1 新型血小板相关血管内皮分泌蛋白SCUBE1抗体
消螨通 分析标准品小鼠白介素13(IL-13)免疫试剂盒钙激活通道蛋白 α 1抗体SCRO/DCUN1D1 鳞状癌相关蛋白抗体
APC-Brdu细胞增殖检测试剂盒(ICF/FACS法)凋亡增强核酸酶抗体Human KLF17 ELISA Kit猪热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒,
染色体脆弱性相关基因抗体Human KIR3DL1 ELISA Kit山羊白介素10(IL-10)ELISA试剂盒,
磷酸化蛋白激酶B抗体Human KLC1 ELISA Kit双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒,
铜转运蛋白质β链抗体Human KIR3DX1 ELISA Kit兔胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒,
酰基辅酶A合成酶家族4抗体Human KIFAP3 ELISA Kit兔儿茶酚(CA)ELISA试剂盒,
酸性磷酸酶样蛋白2抗体Human KLF5 ELISA Kit荆豆凝集素(UEA)ELISA试剂盒,
AHNAK核蛋白2抗体Human KLF4 ELISA Kit基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA酶联吸附试剂盒--
二磷酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗体Human KIFC1( Kinesin family member C1) ELISA Kit色