公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
中文名称:磺酰罗丹明B/SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒
英文名称:Sulforhodamine B Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit
产品规格:500T
发货周期:1~3天
磺酰罗丹明是一种能与生物大分子的碱性氨基酸结合的水溶性蛋白染料,其结合于细胞中的量的多少可以反映总蛋白量进而反映细胞数的多少。在515nm 波长处的OD 值与活细胞数呈良好的线性关系。
操作方法
1. 以96 孔细胞培养板为例说明
2. 从细胞培养箱内取出待测96 孔细胞培养板,弃去上清;
3. 小心加入固定液,每孔100ul,4℃孵育1 小时;弃去固定液;
4. 加入洗涤液A,每孔100ul,室温下静置30 ,弃去洗涤液A;重复步骤4;
5. 加入染色液,每孔50ul,室温下避光孵育15 分钟;弃去染色液;
6. 加入洗涤液B,每孔100ul,弃去洗涤液B,此步骤需快速完成;
7. 重复步骤8 5-10 次,直至把多余染料洗尽为止;
8. 加入溶解液,每孔100ul,室温下避光孵育5 分钟;
9. 在波长515nm 处,读取光吸收值;
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
顺-6-壬烯 95%小鼠二氧化酶(DAO)免疫试剂盒溴脱氧尿苷抗体SLAMF6 SLAMF6抗体
顺-6-壬烯 95%,FG小鼠儿茶酚抑素免疫试剂盒B迁移因2抗体Skp2/skp2 p45 S期激酶相关蛋白2抗体
丁位壬内酯 98%小鼠多萜长二寡糖蛋白环糊精糖转移酶(DDOST/OST-48)免疫试剂盒骨形态发生蛋白2抗体SKP1 S期激酶相关蛋白1抗体
乙橙花酯 95%小鼠多肽YY(PYY)免疫试剂盒骨形态发生蛋白7抗体SKAR DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗体
正辛 AR,99.0%小鼠多巴D1受体(D1R)免疫试剂盒β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体SKALP/Elafin 弹性蛋白酶抑制剂抗体
1-辛 99%小鼠多巴(DA)免疫试剂盒β-连环蛋白/β-连环素/β链接素抗体SKA3 纺锤体和着丝粒相关蛋白3抗体
1-辛 97%小鼠端粒酶(TE)免疫试剂盒癌易感因2和p21蛋白抑制因子抗体SKA2 纺锤体和着丝粒相关蛋白2抗体
罗勒烯 90%小鼠蕈碱型乙酰胆碱受体M2(mAChRM2)自身抗体免疫试剂盒血型抗原体蛋白抗体SKA1 纺锤体和着丝粒相关蛋白1抗体
桂乙酯 96%小鼠蕈硷乙酰胆碱受体M2(CHRM2)免疫试剂盒凯尔血型糖蛋白CD238抗体SISP1/GI24 应激诱导分泌蛋白1抗体
3- 99%小鼠叠氮胸苷(AZT)免疫试剂盒嗜脂蛋白亚家族2成员A2抗体SIRT7 沉默调节样蛋白SirT7抗体
3- ≥98%, FCC小鼠凋亡诱导因子(AIF)免疫试剂盒骨形态发生蛋白10抗体SIRT6 沉默调节相关蛋白6抗体
3- GR,99%小鼠凋亡相关因子配体(FASL)免疫试剂盒溴脱氧尿苷单克隆抗体(增殖标志物)SIRT5 沉默调节蛋白5抗体
3- 95%小鼠凋亡相关因子(FAS/CD95)免疫试剂盒BEND2蛋白抗体SIRT4/SIR 2 like protein 4 沉默调节相关蛋白4抗体
3- ≥95%, FCC小鼠抵抗素(Resistin)免疫试剂盒骨涎蛋白SIRT3 线粒体乙酰化酶3抗体
异丁氧乙酯 98%小鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)免疫试剂盒副溶血性弧菌菌体鞭毛蛋白抗体SIRT1/sirtuin 1 沉默调节蛋白1抗体
磺酰罗丹明B/SRB细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒血管紧张素Ⅱ受体2抗体Human LCE1B ELISA KitmCPC 培养基用于弧分离培养(FDA标准)
ASH1蛋白抗体Human LARS ELISA Kit甘氨酸甲酯盐酸盐
芳香乙酰脱乙酰基酶样蛋白2抗体Human LCK ELISA KitN-叔丁氧羰酰-L-白氨酸酰甘氨酰-L-精氨酸对酰盐酸盐
血管内皮迁移蛋白抗体Human LARP4 ELISA Kit桂皮醛 Cinnamic aldehyde
糖还原酶相关蛋白质抗体Human LARS2 ELISA Kit人水通道蛋白0(AQP-0)ELISA试剂盒,
胆汁酸结合蛋白DDH2抗体Human LARP4 ELISA Kit人腺苷三磷酸结合盒转运体G2(ABCG2)ELISA试剂盒,
血管生成素样蛋白3抗体Human LARP4 ELISA Kit人凝聚素(CLU)ELISA试剂盒,
甘油酯激酶线粒体抗体Human LARP4 ELISA Kit人膜攻击复合物(MAC)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。