中文名称:罗丹明123染色试剂盒
英文名称:Cell Apoptosis Detection Kit(Rhodamine 123)
产品规格:100T
发货周期:1~3天
本试剂盒适用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。罗丹明123(Rhodamine 123)是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料,是一种线粒体跨膜电位的指示剂。它可以快速通过细胞膜,仅需几分钟就可以被具有活性的线粒体所俘获,并且对细胞没有任何毒性。其大激发波长为507nm,大发射波长为529nm。在荧光显微镜下观察,呈现黄绿色荧光,也可用荧光光度计或流式细胞仪检测,通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生。
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实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
己异戊酯 98%小鼠胱天蛋白酶10(CASP-10)免疫试剂盒芳硫酯酶A抗体Smad7/Smad6 Smad 7抗体
2-异-4-噻唑 98%小鼠骨粘连蛋白(ON)免疫试剂盒拟南芥ACA11抗体SMAD5 信号转导分子SMAD5抗体
异戊 98%小鼠骨形成蛋白6(BMP-6)免疫试剂盒AHA3抗体(拟南芥)Smad4 Smad4抗体
吲哚 99%小鼠骨形成蛋白(BMPs)免疫试剂盒化钠ATP酶蛋白a1抗体Smad3 信号转导分子SMAD3抗体
吲哚 ≥99%, FCC, Kosher小鼠骨涎蛋白(BSP)免疫试剂盒化凋亡信号调节激酶1抗体Smad2 信号转导分子Smad-2抗体
异丁酯 99%小鼠骨特异性碱性酶B(ALP-B)免疫试剂盒中性胆固酯水解酶1抗体Smad1 信号转导分子Smad-1抗体
异丁香酚(正+反) 97%小鼠骨特性碱性酶C端肽免疫试剂盒人星形胶质抗体Smac/DIABLO 线粒体促凋亡蛋白抗体
乙酰异丁香酚 ≥98%, FCC小鼠骨特性碱性酶(BALP)免疫试剂盒缩酶A抗体SM22 Alpha 骨架相关蛋白抗体
乙异龙脑酯 90%小鼠骨桥素(OPN)免疫试剂盒膜粘连蛋白6抗体SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠单抗
乙位紫罗兰酮 97%小鼠骨胶原交联(Cr)免疫试剂盒β淀粉样肽(25-35)抗体SLY 2型猪链球菌溶血素抗体
异紫罗兰酮70 60⁻⁷0%小鼠骨钙素/骨谷氨蛋白(OT/BGP)免疫试剂盒血管紧张素I抗体SLURP1/ANUP 抗肿瘤蛋白ANUP抗体
异戊酯 93%小鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫试剂盒肾上腺髓质素抗体(N端20肽)SLU7 SLU7蛋白抗体
异戊酯 mixture of isomers, ≥97%, FG小鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)免疫试剂盒ADP核糖化因子结合蛋白2抗体SLTM 转绿调节因子SLTM抗体
异戊酯 97%小鼠骨成型蛋白9(BMP-9)免疫试剂盒精氨加压素受体2抗体SLT/SLT-IIe/O139 猪水肿素(O139)菌体蛋白抗体
2-丁异酯 Kosher, ≥98%小鼠骨成型蛋白7(BMP⁻⁷)免疫试剂盒凋亡相关斑点样蛋白ASC抗体SLPI/ALK1 分泌型白蛋白酶抑制因子抗体
罗丹明123染色试剂盒过氧化物酶酰基辅酶A氧化酶2抗体Human LGP2 ELISA Kit大鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒,
胆固酰基转移酶1抗体Human LGI3 ELISA Kit大鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒,
磷酸化间变型瘤激酶抗体Human LGR5 ELISA Kit大鼠列腺素F(PGF)ELISA试剂盒,
磷酸化ADP核糖基化因子结合蛋白2抗体Human LGR6 ELISA Kit山羊白介素4(IL-4)ELISA试剂盒,
磷酸化有丝分裂激酶B/C抗体Human LDLRAD1 ELISA Kit兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒,
磷酸化腺泡Acinus蛋白抗体Human LCOR ELISA Kit兔白介素17(IL-17)ELISA试剂盒,
磷酸化肾上腺素能受体β2抗体Human LDOC1 ELISA Kit兔子生长释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒,
APS抗体Human LCORL ELISA Kit胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒--动物,人