实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:Caspase 9荧光法检测试剂盒(AFC)
英文名称:Caspase-9 Fluorescence Metric Assay
产品规格:20T|50T|100T
发货周期:1~3天
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织Caspase-9 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中Caspase-9 为关键的执行分子,与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-9 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-9 由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,终导致细胞凋亡。Caspase-9 荧光检测试剂盒就是将Caspase-9 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-9 剪切后,发色基团即游离出来,可通过荧光酶标仪测定其荧光强度(激发波长=485nm,发射波长=535nm)。
注意事项
1. Caspase-9 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-9 活化的机制,这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-9 活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg,以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求,因为Caspase-9 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关,如测定的RFU 值偏低,可以通过适当延长反应的时间,如果值还是不高,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
桉叶油 99%小鼠质衍生因子1α(SDF-1α/SDF1A)免疫试剂盒载脂蛋白B-mRNA编码蛋白抗体SOX22 核转录因子SOX22抗体
桉叶油 萜GC标准品 ,>99.5% (GC)小鼠质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)免疫试剂盒凋亡诱导因子3抗体Sox2 胚胎干关键蛋白抗体
桉叶油 ≥99%, FCC小鼠质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)免疫试剂盒凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗体SOX11 转录因子SOX-11蛋白抗体
4-乙愈创木酚 99%小鼠质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)免疫试剂盒凋亡诱导蛋白D抗体SOX10 转录因子SOX10抗体
4-乙愈创木酚 ≥98%, FCC, FG小鼠质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)免疫试剂盒性神经鞘脂酶抗体SOSSC/C9orf80 单链DNA结合蛋白相互作用蛋白1
乙麦芽酚 99%小鼠质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP-9/Gelatinase B)免疫试剂盒腺嘌呤核苷转运蛋白1抗体Sortilin/NTR3/Gp95 神经降压素受体3抗体(糖蛋白95)
乙麦芽酚 99%, FCC, FG小鼠质金属蛋白酶8/中性粒胶原酶(MMP-8)免疫试剂盒肌侧索硬化2染色体区域候选蛋白8抗体SorLA/LRP9 低密度脂蛋白受体相关蛋白9抗体
乙酰乙酯 99%小鼠质金属蛋白酶7(MMP⁻⁷)免疫试剂盒ATP酶H+转运溶酶体辅助蛋白2抗体SORBS2/ArgBP2 精氨结合蛋白2抗体
2-丁乙酯 98%小鼠质金属蛋白酶5(MMP-5)免疫试剂盒肝素结合蛋白/阳离子抗菌蛋白37/天青杀素抗体SORBS2/ArgBP2 精氨结合蛋白2抗体
乙丁香酚酯 98%小鼠质金属蛋白酶4(MMP-4)免疫试剂盒核突触蛋白抗体Somatostatin/GRIH 生长抑素抗体
反-3-己烯乙酯 98%小鼠质金属蛋白酶3(MMP-3)免疫试剂盒β-肌动蛋白/β-Actin 抗体(内参抗体)Solute carrier family 1 溶质携带物家族-1抗体
呋喃酮 98%小鼠质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)免疫试剂盒β淀粉样肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗体SODD Bcl2结合抗凋亡蛋白4抗体
呋喃酮 ≥98%, FCC, FG小鼠质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP2/Gel A)抗体免疫试剂盒β淀粉样肽1-16/Aβ1-16抗体SOD4/CCS 超氧化物歧化酶4抗体
呋喃酮 natural, ≥98%, FG小鼠质金属蛋白酶13(MMP-13)免疫试剂盒β淀粉样肽1-28/β-Amyloid 1-28抗体SOD3 超氧化物歧化酶3抗体
柠檬 97%小鼠质金属蛋白酶10(MMP-10)免疫试剂盒激活素受体2A抗体SOD2 超氧化物歧化酶2抗体
Caspase 9荧光法检测试剂盒(AFC)膜粘连蛋白11抗体Human LPPR2 ELISA Kit大鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)ELISA试剂盒,
膜粘连蛋白13抗体Human LPP ELISA Kit大鼠乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒,
磷酸化促肾上腺皮质ACTH抗体Human LMNB2 ELISA Kit大鼠糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒,
磷酸化蛋白激酶AKT1抗体Human LPXN ELISA Kit大鼠骨胶原交联(Cr)ELISA试剂盒,
磷酸化蛋白激酶B抗体Human LMF2 ELISA Kit大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒,
磷酸化钠ATP酶蛋白a1抗体Human LRAT ELISA Kit猪褪黑素(MT)ELISA试剂盒,
磷酸化内收蛋白a1抗体Human LRCH1 ELISA Kit猴胰岛素(INS)ELISA试剂盒,
磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体Human LIN7A ELISA Kit鹿红膜蛋白(EMP)ELISA试剂盒,