公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。中文名称:Caspase 2荧光法检测试剂盒(AFC)
英文名称:Caspase-2 Fluorescence Metric Assay
产品规格:20T|50T|100T
发货周期:1~3天
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织Caspase-2 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中Caspase-2 为关键的执行分子,与DNA 断裂、染色质凝聚和凋亡小体形成有关。Caspase-2 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中,没有活性;但在细胞发生凋亡阶段,它被激活,活化的Caspase-2 由两个大亚基和两个小亚基组成,裂解相应的胞浆胞核底物,终导致细胞凋亡。Caspase-2 荧光检测试剂盒就是将Caspase-2 序列特异性的多肽偶联至发色基团。当底物被Caspase-2 剪切后,发色基团即游离出来,可通过荧光酶标仪测定其荧光强度(激发波长=485nm,发射波长=535nm)。
注意事项
1. Caspase-2 Substrate 避光保存及使用。
2. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-2 活化的机制,这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-2 活性无明显改变,需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织50~100mg,以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求,因为Caspase-2 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关,如测定的RFU 值偏低,可以通过适当延长反应的时间,如果值还是不高,可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
仲辛 ≥98%,FG小鼠可溶性补体激活产物SC5b9 免疫试剂盒化自噬相关蛋白3抗体STAT6 信号转导和转录激活因子6抗体
硫铋 CP,98.0%小鼠可溶性Toll样受体9(sTLR9/sCD289)免疫试剂盒缩酶2抗体STAT5b 信号转导和转录激活因子5b抗体
硫铋 AR,99%小鼠可溶性Toll样受体4(sTLR4)免疫试剂盒胰腺α淀粉酶抗体STAT5 信号转导和转录激活因子5抗体
氢氧化铋 AR,90%小鼠可溶性Toll样受体2(sTLR2)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白11抗体STAT4 信号转导和转录激活因子4抗体
次碳铋 AR,90.0%小鼠可溶性Endoglin(ENG/sCD105)免疫试剂盒化非受体酪氨激酶c-Abl抗体STAT3 信号转导和转录激活因子3抗体
次碳铋 CP小鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)免疫试剂盒化活化复制因子2抗体STAT2 信号转导和转录激活因子2抗体
α,α'-二溴对二 97%小鼠可溶性CD40配体(sCD40L)免疫试剂盒固酮还原酶家族1成员D1抗体STAT1 信号转导与转录激活因子1抗体
重氮乙乙酯 91%,≤10% dichloromethane小鼠可溶性CD30配体(sCD30L)免疫试剂盒肝血管生成素相关蛋白抗体STARD8 GTP酶激活因子STARD8抗体
95%小鼠颗粒酶B(Gzms-B)免疫试剂盒自水解酶结构域5蛋白抗体STARD5 促黄体激素诱导蛋白5抗体
0.99小鼠颗粒酶A(Gzms-A)免疫试剂盒酰辅酶A硫酯酶8StAR/StARD1 促黄体激素诱导蛋白抗体
标准溶液1.35-4.29mg/L,水质分析用小鼠抗组蛋白(H2A-H2B)-DNA抗体/抗二聚体-DNA抗体免疫试剂盒溶血脂酰转移酶β抗体Staphyloccocus aureus Rosenbach tropina 金黄萄球菌菌体蛋白抗体
叔丁 98%小鼠抗内膜抗体(EMAb)免疫试剂盒AFP4b蛋白抗体Stanniocalcin 1 斯钙素抗体
叔丁 95%小鼠抗中性粒核周抗体(pANCA)免疫试剂盒载脂蛋白C2抗体STAM 信号转导衔接蛋白1抗体
叔丁钠 98%小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)免疫试剂盒载脂蛋白A5抗体stabilin1/STAB 1 淋巴管内皮和血管内皮受体1抗体
N,N-二酰 农残, ≥99.9%小鼠抗增殖核抗原抗体(PCNA)免疫试剂盒载脂蛋白A2抗体ST5/DENND2B 抑癌蛋白5抗体
Caspase 2荧光法检测试剂盒(AFC)磷酸化活化复制因子2抗体Human LSR ELISA Kit小鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒,
磷酸化APP(Tyr757)淀粉样肽体蛋白抗体Human LUC7L2 ELISA Kit小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒,
丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶ATR抗体Human LUC7L ELISA Kit小鼠C肽(C-Peptide)ELISA试剂盒,
去整合素样金属蛋白酶18抗体Human LTBP1(Latent-transforming growth factor beta-binding protein 1) ELISA Kit小鼠骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒,
活化转录因子6抗体Human LUZP1 ELISA Kit小鼠诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA试剂盒,
衔接蛋白β抗体Human LXN ELISA Kit小鼠糖化血红蛋白A1c(A1c)ELISA试剂盒,
衔接蛋白γ/γ-Adaptin抗体Human LY6D ELISA Kit大鼠红生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒,
水通道蛋白-9抗体Human LSM10 ELISA Kit大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)ELISA试剂盒,
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。