实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称:Annexin V-PE/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒
英文名称:Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit
产品规格:10T|20T|50T|100T
发货周期:1~3天
在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素PE 标记,以标记了的Annexin V 作为荧光探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
7-AAD(7-amino-actinomycin D)是一种核酸染料,它不能通过正常质膜,随着细胞凋亡、细胞死亡过程,质膜对7-AAD 的通透性逐渐增加,结合细胞凋亡中DNA 的有控降解,在合适波长激发光的激发下可发出明亮的红色荧光,通过7-AAD 标记DNA 的强弱,将细胞分为三群:7-AAD 强为死亡细胞,7-AAD 弱是凋亡细胞,7-AAD-为正常活力细胞。7-AAD 同PI 有着相似的荧光特性,但其发射波谱较PI 窄,对其他检测通道的干扰更小,在多色荧光分析中是PI 的佳替代品,可与Annexin V-PE 联合使用。
本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测(不推荐用于检测组织样本)。
公司产品仅用于科研现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于1×105,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
N,N'-琥珀酰亚碳酯 98%小鼠嗜粒趋化蛋白Eotaxin 3(Eotaxin 3)免疫试剂盒锚蛋白重复域5抗体TGM3 转谷氨酰酶3抗体
4-二氨吡啶 99%小鼠嗜粒趋化蛋白Eotaxin 2(Eotaxin 2/CCL24)免疫试剂盒脑钠通道蛋白2抗体TGM2/TG2/Transglutaminase 2 谷氨酰转酶2抗体
4,4'-二氧三 98%小鼠嗜环蛋白/亲环素A(CyPA)免疫试剂盒脑钠通道蛋白4抗体TGFβ1 转化生长因子β1抗体
4,5-二咪唑 98%小鼠视黄结合蛋白(RBP)免疫试剂盒小肠钠通道蛋白5抗体TGFB4/LEFTY2 转化生长因子β4抗体
4,5-二咪唑 99%小鼠生长抑素(SS)免疫试剂盒APXL蛋白抗体TGF Beta R3 转移生长因子β受体3抗体(TGF-βRⅢ)
二吡咯烷(N-琥珀酰亚氨氧)碳六氟盐 98%小鼠生长激素(GH)免疫试剂盒敏感离子通道蛋白3抗体TGF beta R2/TGFBR2 转移生长因子β受体2抗体(TGF-βRⅡ)
4-(4,6-二氧三)-4-吗啉盐盐 97%小鼠生长分化因子15(GDF15)免疫试剂盒天门冬氨β羟化酶抗体TGF Beta R1/TGFBR1 转移生长因子β受体1抗体(TGF-βRⅠ)
3,5-二叔丁溴 99%小鼠肾损伤分子1(Kim-1)免疫试剂盒精氨加压素受体2抗体TGF beta 3 propeptide 转移生长因子β3抗体
O-[(乙氧羰)]-N,N,N',N'-四硫尿四氟盐 98%小鼠肾素体免疫试剂盒骨架肌动蛋白样蛋白3抗体TGF beta 3 转移生长因子β3(TGFβ3)抗体
1-乙-(3-二氨)碳二亚盐盐 98.5% 小鼠肾素(Renin)免疫试剂盒膜粘连蛋白8抗体TGF beta 2 Propeptide 转移生长因子β2抗体
2-乙氧-1-乙氧碳酰-1,2-二氢喹啉 99%小鼠肾上腺髓质素(ADM)免疫试剂盒水通道蛋白8抗体TGF beta 2 转化生长因子β2(TGFβ2)抗体
2-氟-1,3-二化咪唑翁六氟酯 97%小鼠肾上腺素能a1A受体(ADRA1A)免疫试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白40抗体TGF beta 1/LAP 转化生长因子β(TGFβ)抗体
乙脒 99%小鼠肾上腺素(EPI)免疫试剂盒凋亡抑制因子5抗体TGF Beta 1(CT) 转化生长因子β1抗体
四氟代脲六氟酯 98%小鼠神经营养因子4(NT-4)免疫试剂盒水通道蛋白-3抗体TGF Beta 1 转化生长因子β1抗体
9-芴-N-琥珀酰亚碳酯 98%小鼠神经营养因子3(NT-3)免疫试剂盒载脂蛋白D抗体TGF alpha 转移生长因子α抗体
Annexin V-PE/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒锚蛋白重复结构域蛋白9抗体Human MAP ELISA Kit诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)ELISA酶联吸附试剂盒--卖
锚蛋白重复及SAM结构域蛋白1A抗体Human MAPK4 ELISA KitBPL琼脂
脂肪特定转录因子2抗体Human MAPK13 ELISA Kit人维生素B12(VB12)ELISA试剂盒,
载脂蛋白L3抗体Human MAPK7 ELISA Kit小鼠核因子κB受体活化因子配基(RANKL)ELISA试剂盒,
肿瘤/抗原81抗体Human MAPK6 ELISA Kit大鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒,
共济失调蛋白7样2抗体Human MAPKBP1 ELISA Kit大鼠抗IVIgG抗体ELISA试剂盒,
盐耐药蛋白ARS2抗体Human Marcks ELISA Kit大鼠角化因子(KAF)/双调蛋白(AR)ELISA试剂盒,
芳香基硫酸酯酶1抗体Human MAPRE2 ELISA Kit抗肌动蛋白抗体(AAA)ELISA试剂盒--动物,人