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Ad-mCherry-GFP-LC3B
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品牌名称：$brandModel.Title型号： 原产地：中国大陆 更新时间：2026/11/5 9:40:57
产品摘要：Ad-mCherry-GFP-LC3B公司正在热销的产品：人转谷氨酰酶2C多肽(TGM2)ELISA试剂盒
人Ⅰ型胶原N端肽(PⅠNP)ELISA试剂盒
人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试剂盒
人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒
人肝脂酶(HL)ELISA试剂盒
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详细内容
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
中文名称：Ad-mCherry-GFP-LC3B
英文名称：adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
英文名称：adenovirus expressing mCherry-GFP-LC3B fusion protein
产品规格：1ml|10×1ml
发货周期：1～3天
本品是一种可以表达mCherry-GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究为广泛。到目为止，LC3B被认为是细胞自噬信号通路为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶， 以ATG3为E2样连接酶，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰(phosphatidylethanolamine,PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来。
自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下， 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学域的一个新的研究热点。
Ad-mCherry-GFP-LC3B是的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达红色荧光蛋白mCherry、绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的红色和绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。
自噬小体在与溶酶体融合过程中，溶酶体内的酸性环境会导致GFP荧光淬灭，这为追踪GFP-LC3B的细胞定位增加了难度。mCherry是一种来自于蘑菇珊瑚(mushroom coral)的单体红色荧光蛋白，当其与GFP进行LC3B的共同标记时，在GFP被溶酶体酸性环境所淬灭的情况下，可以发出红色荧光的mCherry因为其卓越的稳定性而被保留。因此，通过融合表达mCherry-GFP-LC3B蛋白，可以非常有效地追踪自噬过程。在用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B以弥散的黄色荧光(mCherry和GFP的综合效果)形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下mCherry-GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以黄色斑点的形式表现出来(LC3B dot or punctae)；当自噬体与溶酶体融合后，因GFP荧光的部分淬灭而以红色斑点的形式表现出来。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，共可以感染10个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，共可以感染50个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。
储存条件：-20℃，有效期1～2个月。
公司产品仅用于科研现货供应，质量有保证、价格优惠、实验效果好，我司为您提供免费代测服务，同时提供新价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
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培养操作步骤：
1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；
2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；
3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；
4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片完全浸在培养液中；
5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
注意事项
1. 微量试剂取用请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
2-丁乙酯 99%小鼠胰高血糖素(GC)免疫试剂盒衔接蛋白β抗体TRIM3/RNF22 环指蛋白22抗体
酯 98%小鼠胰淀素(Amylin)免疫试剂盒衔接蛋白γ/γ-Adaptin抗体TRIM29/ATDC 共济失调毛细血管扩张症D相关蛋白抗体
聚烯 平均分子量M.W ~3,000 小鼠胰岛抗体(ICA)免疫试剂盒水通道蛋白-9抗体TRIM25 雌激素反应锌指蛋白抗体
聚烯 平均分子量M.W ~1,800 小鼠胰岛素自身抗体(IAA)免疫试剂盒膜粘连蛋白A3抗体TRIM17/RNF16 环指蛋白16抗体
聚烯 平均分子量M.W ~450,000小鼠胰岛素原(PI)免疫试剂盒膜粘连蛋白 A4抗体TRIM17/RNF16 环指蛋白16抗体
三钠 97%小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)免疫试剂盒自噬相关蛋白8A抗体TRIM11/RNF92 环指蛋白92抗体
三钠 HPLC，99.0% (T)小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)免疫试剂盒化蛋白激酶B抗体TRIM10/RNF9 环指蛋白9抗体
三酐 98%小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)免疫试剂盒化腺苷单活化蛋白激酶α1抗体TRIB3/p65 interacting inhibitor of NF-kappaB 神经死亡诱导蛋白激酶抗体
土霉素 97%小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP-2)免疫试剂盒化蛋白激酶B抗体TRIB2 MAPK调控蛋白TRB2抗体
硫链霉素 720 I.U./mg小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)免疫试剂盒脱氧胞苷脱氨酶蛋白抗体TRIAD3 锌指蛋白抑制NFκB蛋白抗体
椰子油 CP小鼠胰岛素样生长因子2(IGF-2)免疫试剂盒蛋白激酶锚定蛋白13抗体TRH 促状腺素释放激素抗体
氢氧化 AR,90%小鼠胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)免疫试剂盒AP-1μ2抗体TRF2 端粒结合蛋白2抗体
氢氧化 granules,AR,90%小鼠胰岛素样生长因子1(IGF-1)免疫试剂盒肥大膜抑制性受体Allergin1抗体TReP132/RAPA 癌抗雌激素抵抗蛋白2抗体
氢氧化钠 GR,97%,片状小鼠胰岛素受体β(ISR-β)免疫试剂盒脑钠通道蛋白1抗体TREML2/TLT2 髓系触发受体样转录因子2抗体
氢氧化钠 颗粒状,AR,96%小鼠胰岛素降解酶(IDE)免疫试剂盒肌动蛋白相关蛋白2/3复合亚单位B1抗体TREML1/TLT1 髓系触发受体样转录因子1抗体
Ad-mCherry-GFP-LC3BATPIF1蛋白抗体Human LEFTY2 ELISA Kit小鼠脑红蛋白（NGB）ELISA试剂盒,
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Attractin蛋白抗体Human LEF1 ELISA Kit小鼠α2抗纤溶酶（α2-AP）ELISA试剂盒,
磷酸化有丝分裂激酶B抗体Human LCTL ELISA Kit白活化黏附因子（ALCAM）ELISA试剂盒－－动物，人
肌动蛋白相关蛋白M1抗体Human LDB1 ELISA KitⅠ型胶原N末端肽（NTX）ELISA试剂盒－－动物，人
ALKB蛋白抗体Human LDB3 ELISA Kit包虫抗体IgG ELISA试剂盒－－动物，人
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热门标签：Ad-mCherry-GFP-LC3B
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