中文名称:Ad-GFP-LC3B
英文名称:Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein
产品规格:1ml|10×1ml
发货周期:1~3天
本品是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒,可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(auhagy)的检测。
LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族,其中对于LC3B的研究为广泛。到目为止,LC3B被认为是细胞自噬信号通路为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白,在蛋白合成后,被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白,从而暴露出C端的甘氨酸,人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中,其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程,以ATG7为E1样激活酶, 以ATG3为E2样连接酶,以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶,在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同,LC3B II定位于自噬体的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后,自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切,而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大,但由于其强的疏水性,在SDS-PAGE电泳时,LC3B II比LC3B I迁移得更快,其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后,在非自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中;而在自噬的情况下,荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上,以斑点的形式表现出来。
自噬是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关,在饥饿等不利的环境条件下, 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分,为细胞的生存提供能量及原材料,促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用,自噬已经成为细胞生物学域的一个新的研究热点。
Ad-GFP-LC3B是的重组腺病毒,感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白,呈现明亮的绿色荧光,可以用于细胞自噬的检测。
腺病毒感染细胞后为瞬时表达,通常不会与基因组DNA重组,不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后,有效表达时间通常不少于7天,不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。
Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统,感染普通的细胞后不能进行扩增和重组,从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。
本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。
本产品的滴度≥1×108 pfu/ml,使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞,每孔50万细胞计算,共可以感染10个孔;如果按照20 MOI感染24孔板的细胞,每孔10万细胞计算,共可以感染50个孔。如果MOI值提高,则相应可以感染的孔数会减少;如果MOI值降低,则相应可以感染的孔数会增加。
储存条件:-20℃,有效期1~2个月。
产品属性:
| 产品名称 | 英文名称 | 产品规格 |
| Ad-GFP-LC3B | Adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein | 1ml|10×1ml |
公司产品仅用于科研细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
氟 Standard for GC ,≥99.6% (GC)小鼠抑制素A(INH-A)免疫试剂盒水通道蛋白-2抗体TrK A/NTRK1 酪氨激酶A抗体
氟 CP小鼠抑瘤素M(OSM)免疫试剂盒血管紧张素原抗体Trk A/B/C 酪氨激酶A/B/C抗体
氟 分析标准品小鼠乙型肝炎核心抗体(HBcAb)免疫试剂盒雄激素受体抗体TRIP1/PSMC5 状腺受体相互作用蛋白1抗体
己丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)小鼠乙型肝炎表面抗原(HBsAg)免疫试剂盒死亡调节蛋白抗体(凋亡、半胱蛋白酶激活抑制剂)TRIP 肿瘤坏死因子受体相互作用蛋白抗体
己丁酯 ≥98%小鼠乙型肝炎表面抗体(HBsAb)免疫试剂盒轴蛋白1抗体Triosephosphate isomerase 糖异构酶抗体
丁位十二内酯 98%小鼠乙型肝炎e抗原(HBeAg)免疫试剂盒自噬相关蛋白9B抗体TRIM7/RNF90 糖原生成素相互作用蛋白抗体
丁乙酯 99%小鼠乙型肝炎e抗体(HBeAb)免疫试剂盒自噬相关蛋白12抗体TRIM6/RNF89 环指蛋白89
异戊 98%小鼠乙酰辅酶A 免疫试剂盒自噬相关蛋白13抗体TRIM5α/RNF88 环指蛋白88抗体
异戊 Standard for GC,>99%(GC)小鼠乙酰胆碱酯酶(AChE)免疫试剂盒自噬相关蛋白3抗体TRIM50 TRIM50蛋白抗体
异戊 ≥97%,Kosher小鼠乙酰胆碱受体抗体(AChRab)免疫试剂盒整合素样金属蛋白酶与凝血酶4型抗体TRIM47 星形瘤高表达蛋白抗体(环指蛋白100)
异丁异丁酯 98%小鼠乙酰胆碱(ACH)免疫试剂盒化活化复制因子2抗体TRIM41 环指蛋白调节蛋白激酶C蛋白抗体
己异丁酯 98%小鼠胰脂肪酶(PL)免疫试剂盒化APP(Tyr757)淀粉样肽体蛋白抗体TRIM36/RNF98 环指蛋白98抗体
丁酯 99%小鼠胰激肽原酶(PK)免疫试剂盒丝氨/苏氨蛋白激酶ATR抗体TRIM35 TRIM35蛋白抗体
异丁酯 99%小鼠胰高血糖素样肽2(GLP-2)免疫试剂盒去整合素样金属蛋白酶18抗体TRIM32 TRIM32抗体
异丁酯 ≥99%,Kosher小鼠胰高血糖素样肽1(GLP-1)免疫试剂盒活化转录因子6抗体TRIM31 环指蛋白HCG1抗体
Ad-GFP-LC3B活化转录因子5抗体Human LCOR ELISA Kit小鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒,
活化转录因子6β抗体Human LCORL ELISA Kit大鼠血管舒缓激肽(BK)ELISA试剂盒,
AICAR甲酰基转移酶抗体Human LCTL ELISA Kit兔子列腺素E2(PGE2)ELISA试剂盒,
磷酸化扩张性共济失调症突变蛋白抗体Human LDB3 ELISA Kit抗乙型肝炎病表面抗体(HBsAb)ELISA试剂盒--动物,人
ATP5E蛋白抗体Human LDHAL6A ELISA Kit丙型肝炎IgG(HCV-IgG)ELISA试剂盒--动物,人
ATP5G2蛋白抗体Human LDB1 ELISA Kit4-氨基马尿酸钠
ATP6V0D2蛋白抗体Human LDLRAD1 ELISA Kit人类白抗原C(HLA-C)ELISA试剂盒,
ATP6V1B2蛋白抗体Human LDOC1 ELISA Kit人B受体(BCR)ELISA试剂盒,
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.